[发明专利]一种大规模合成长链核酸分子的方法

摘要

一种由短链核酸分子合成长链核酸分子的大规模、低成本、高效率合成方法，包括：1)短链核酸分子片段的合成；2)端点的化学修饰：将位于长链核酸分子端点位置的小片段核酸分子的端点进行化学修饰，称为“纯化序列”；3)短链核酸分子片段的连接：准备块状固体，所述固体表面具有化学基团和/或生物分子，将该块状固体加入步骤2得到的纯化序列的溶液中进行孵育，纯化序列将固定化到固体表面，将块状固体与步骤1合成得到的小片段核酸分子在溶液中通过互补配对形成带有缺口的双链，在连接酶作用下形成完整的长链核酸分子；4)纯化：分离并冲洗块状固体；5)利用核酸扩增技术对固定化到块状固体表面的目标长链核酸分子进行扩增放大。

主权项

一种大规模合成长链核酸分子的方法，其特征在于该方法先合成短链核酸分子，然后将短链核酸分子连接为长链核酸分子，所述长链核酸分子的长度至少为短链分子长度的2倍；该方法包括如下步骤：1)短链核酸分子片段的设计及合成：设计一段包含目标长链核酸分子的核苷酸序列，将所述核苷酸序列的双链中的每一条单链分别划分为若干个小片段，两条链中的划分点彼此错开，合成所述小片段；2)端点的化学修饰：将位于上述核苷酸序列端点位置的4条小片段核酸分子中的至少一条的端点—该端点同时也是上述核苷酸序列的端点—进行化学修饰，使其带有可以发生生物和/或化学反应的化学基团和/或生物分子，上述进行了化学修饰的小片段核酸分子称为“纯化序列”；3)短链核酸分子片段的连接：步骤1合成得到的包括上述纯化序列的小片段核酸分子在溶液中通过互补配对，形成带有缺口的双链，在核酸分子连接酶的作用下，形成完整的长链核酸分子；4)纯化：准备块状固体，所述固体表面具有化学基团和/或生物分子，上述化学基团和/或生物分子能够与纯化序列上的化学基团和/或生物分子连接，将该块状固体加入步骤3得到的含有长链核酸分子的溶液中进行孵育，包含目标长链核酸分子的核苷酸序列将通过纯化序列上的化学基团和/或生物分子固定化到固体表面，分离得到块状固体，冲洗块状固体；5)扩增：利用核酸扩增技术对固定化到块状固体表面的包含目标长链核酸分子的核苷酸序列进行扩增放大；任选的步骤6)剪切：通过酶切除核苷酸序列中除目标长链核酸分子之外多余的核苷酸片段，得到目标核酸分子。