[发明专利]北冬虫夏草多糖两阶段发酵合成工艺

摘要

本发明属微生物领域，具体涉及一种北冬虫夏草多糖两阶段发酵合成工艺，本发明将北冬虫夏草菌种接种在马铃薯斜面培养基上恒温培养后接入含种子培养基的三角瓶中震荡培养，然后接入含发酵培养基的发酵罐中，发酵过程如下：恒温通风搅拌条件下培养北冬虫夏草4-5天，此阶段主要是提供给适合北冬虫夏草菌体生长的培养条件，使北冬虫夏草大量的繁殖；然后在恒温不通风、轻微搅拌条件下培养2-3天，将培养液离心，获得的上清液中加入两倍体积的乙醇，搅拌，4℃过夜，再次离心获得的沉淀物经过干燥获得北冬虫夏草多糖，本发明工艺设计合理，操作简单，适合大规模工业化生产，能解决药源紧缺的局面，效益显著。

主权项

1.一种北冬虫夏草多糖两阶段发酵合成工艺，其特征是，它包括以下步骤：a.保存菌种：将生长在马铃薯斜面培养基的北冬虫夏草菌种保存在4℃冰箱中备用；b.斜面菌种活化：将上述步骤a中保存的北冬虫夏草菌种用灭菌后的接种铲转接到马铃薯斜面培养基，在25℃恒温箱中培养7天，得到活化后的北冬虫夏草菌种，备用；c.种子培养：将上述步骤b活化后的北冬虫夏草菌种用灭菌的接种钩切约1cm2带培养基的斜面菌丝转入装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，在摇床中25℃、150r/min震荡培养4-5天，得到种子液备用；所述种子培养基的营养成分及加入量如下：按上述组分及加入量配成液体的种子培养基，在121℃，0.1MPa下加热灭菌20分钟后冷却，待用；d.发酵培养：将上述步骤c培养好的种子液以10％接种量接入含发酵培养基的发酵罐中发酵，发酵培养过程包括两个阶段：第一阶段发酵条件包括：发酵罐温度25℃，通风量1vvm，搅拌转速100-150rpm，发酵罐压0.05MPa的条件下培养4-5天；第二阶段发酵条件：发酵罐罐温25℃，通风量0vvm(不通气)，搅拌转速30-50rpm条件下培养2-3天，得冬虫夏草菌体培养液；所述发酵培养基的营养成分及加入量如下：按上述组分及加入量配成液体的发酵培养基，在121℃，0.1MPa下加热灭菌20分钟后冷却，待用；e.过滤分离菌体：将上述步骤d发酵结束后的冬虫夏草菌体培养液用不锈钢板框过滤机过滤冬虫夏草菌体，得冬虫夏草菌体和上清液，过滤收集的冬虫夏草菌体用蒸馏水冲洗三次，于60-70℃干燥，冬虫夏草菌体含水量控制在7-8％；f.乙醇醇析：将上述步骤e得到的上清液加入两倍体积的95％的乙醇醇析，在磁力搅拌机上以200r/m搅拌30分钟后，在4℃过夜；g.离心干燥：将上述步骤f过夜后的液体进行12000rpm离心，收集沉淀物，在70-80℃恒温烘箱烘干，含水量控制在7-8％，获得干燥的北冬虫夏草多糖；h粉碎储存：将上述步骤g干燥后的北冬虫夏草多糖粉碎过筛，置于通风干燥处储存，得本发明产品北冬虫夏草多糖。