[发明专利]一种检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的方法

摘要

本发明涉及一种能够检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的反相HPLC方法。该方法包括样品预处理、游离水含量的测定、总类胡萝卜素提取、水解和HPLC分析等步骤。本方法可以准确客观地检测出酸浆果实和宿萼中β-隐黄质的含量，将有非常显著的现实应用意义。

主权项

酸浆宿萼中β 隐黄质含量的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：A)样品预处理将酸浆的宿萼与浆果剥离，再用组织捣碎机将酸浆宿萼粉碎成丝状宿萼样品；B)游离水含量的测定把准确称取的丝状宿萼样品置于表面皿中，在温度40～80℃烘箱中烘干至恒重，然后，按下式计算样品中游离水的含量： X = M - M ′ M × 100 - - - ( 1 ) 式中：X＝游离水含量，以％(重量)计；M＝烘干前重量，以克计；M’＝烘干后重量，以克计；C)总类胡萝卜素提取准确称取步骤A)得到的丝状宿萼样品10重量份，再加入5～8重量份石英砂和以所述丝状宿萼样品重量计4～8倍的选自丙酮、乙醇、甲醇或四氢呋喃的第一有机溶剂，研磨5～15min后静置分离4～8min，取上清液作为“第一萃取溶媒”；剩余物再加入与所述的第一有机溶剂等量的选自正己烷、石油醚或乙酸乙酯的第二有机溶剂，研磨5～15min后静置分离4～8min，取上清液作为“第二萃取溶媒”，并反复用第二有机溶剂研磨提取，直至上清液和提余物为无色；将第一萃取溶媒和所有的第二萃取溶媒合并，置于分液漏斗中，加入与合并萃取溶媒等量的蒸馏水，剧烈震荡混合，静置分离25～35min，取上清液在温度40℃、压力 0.06MPa与旋转速度60rpm的条件下旋转浓缩至干，得到0.5～1.5重量份含有总类胡萝卜素酯的提取物；D)水解使用20～40重量份的由正己烷 乙醇 丙酮 甲苯按照体积比10∶6∶7∶7组成的稀释液将步骤C)得到的含有总类胡萝卜素酯的提取物完全溶解，得到所述提取物溶液再加入以所述溶液体积计0.1～0.5倍重量百分浓度为35～45％的碱性甲醇溶液，在温度50～60℃下进行水解反应15～25min后，冷却到室温；然后，将所述冷却反应液转移至分液漏斗中，并用20～40重量份的正己烷反复洗涤反应瓶，洗涤液合并至分液漏斗中，向反应液中加入20～60重量份的重量百分浓度为5～15％的Na2SO4溶液，剧烈震荡后，在避光的条件下静置分离0.8～1.4h，弃去下层相，将收集的上层溶液转移至100mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，准确移取其溶液1mL，离心分离10～15min，得到的上清液进行HPLC分析；E)HPLC分析a)β 隐黄质标准溶液配制准确称取β 隐黄质参比样品1mg，用1mL丙酮溶解后转移至25mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，配制成40μg/mL的储备液；准确量取配制好的储备液，用逐级稀释法，配制成质量浓度分别为0.00、0.039、0.078、0.156、0.313、0.625、1.250、2.500、5.000μg/mL的标准溶液；b)HPLC分析条件的设定色谱柱：DiamonsilTM，5μm，4.6mmx25cm；流动相A：以体积计9∶1的乙腈 水混合物；流动相B：乙酸乙酯；线性梯度洗脱：流动相B的体积百分浓度在25min内由0％增加至100％；流速：1.0mL/min；检测波长：450nm；PDA波长范围250nm～550nm；进样量：20μL；c)标准曲线绘制使用C18 HPLC，测定步骤a)中配制的β 隐黄质标准溶液在λ＝450nm处的峰面积，再结合所述标准溶液浓度绘制标准曲线；d)样品中β 隐黄质含量的HPLC测定使用高效色谱仪，在步骤b)设定的条件下测定样品在λ＝450nm处的峰面积，根据步骤c)所绘制的标准曲线得到该样品的β 隐黄质含量。