[发明专利]一种检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的方法

说明书

【技术领域】

本发明属于天然植物中有效成分的检测方法的技术领域，更具体地，本发明涉及一种能够检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的反相HPLC方法。

【背景技术】

酸浆(Physalis alkekengi L.var.franchetii(Masters)Makino)为茄科(Solanaceae)酸浆属(Physalis)的一种多年生草本植物，又名“红姑娘”、“洋姑娘”、“红灯笼”、“锦灯笼”等。酸浆果实为球状浆果，外部有宽大四棱型宿萼包裹，呈灯笼形囊状，在我国大部分地区均有分布，全草均可入药，果实可加工成果汁和果酱等制品。酸浆的宿萼和果实组织中含有丰富的β-隐黄质，且以脂肪酸酯形式存在，其结构式如下，R＝脂肪酸基：

其中以宿萼中的含量最为丰富，在0.1～0.5％(W/DW)之间。许多情况下，β-隐黄质在这些组织中与其合成前体-β-胡萝卜素(β-Carotene)和玉米黄素(Zeaxanthin)共存。

因此，在检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量时，首先应当将其中的β-隐黄质酯水解，形成游离态的β-隐黄质(单体)，应用高效液相色谱(HPLC)将其与其它类胡萝卜素分离，才能进行定性、定量测定。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种能够检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的反相HPLC方法；

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种能够检测酸浆宿萼中β-隐黄质含量的反相HPLC方法，该方法的步骤如下：

酸浆宿萼中β-隐黄质含量的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：

A)样品预处理

将酸浆的宿萼与浆果剥离，再用组织捣碎机将酸浆宿萼粉碎成丝状宿萼样品；

B)游离水含量的测定

把准确称取的丝状宿萼样品置于表面皿中，在温度40～80℃烘箱中烘干至恒重，然后，按下式计算样品中游离水的含量：

X=M-M′M×100---(1)]]>

式中：

X＝游离水含量，以％(重量)计；

M＝烘干前重量，以克计；

M’＝烘干后重量，以克计；

C)总类胡萝卜素提取

准确称取步骤A)得到的丝状宿萼样品10重量份，再加入5～8重量份石英砂和以所述丝状宿萼样品重量计4～8倍的选自丙酮、乙醇、甲醇或四氢呋喃的第一有机溶剂，研磨5～15min后静置分离4～8min，取上清液作为“第一萃取溶媒”；剩余物再加入与所述的第一有机溶剂等量的选自正己烷、石油醚或乙酸乙酯的第二有机溶剂，研磨5～15min后静置分离4～8min，取上清液作为“第二萃取溶媒”，并反复用第二有机溶剂研磨提取，直至上清液和提余物为无色；

将第一萃取溶媒和所有的第二萃取溶媒合并，置于分液漏斗中，加入与合并萃取溶媒等量的蒸馏水，剧烈震荡混合，静置分离25～35min，取上清液在温度40℃、压力-0.06MPa与旋转速度60rpm的条件下旋转浓缩至干，得到0.5～1.5重量份含有总类胡萝卜素酯的提取物；

D)水解

使用20～40重量份的由正己烷-乙醇-丙酮-甲苯按照体积比10∶6∶7∶7组成的稀释液将步骤C)得到的含有总类胡萝卜素酯的提取物完全溶解，得到所述提取物溶液再加入以所述溶液体积计0.1～0.5倍质量百分浓度为35～45％的碱性甲醇溶液，在温度50～60℃下进行水解反应15～25min后，冷却到室温；