[发明专利]一种利用基因拆分控制转基因飘流的方法

摘要

本发明公开了属于转基因生物安全技术领域的一种利用基因拆分控制转基因飘流的方法。该方法将完整的目的基因拆分成N端和C端两部分，分别与Intein的N端和C端剪接域的基因序列连接，形成融合基因A和融合基因B，将融合基因A和融合基因B通过农杆菌转化和杂交技术手段，导入受体植物核基因组或者将融合基因A导入核基因组而融合基因B导入叶绿体基因组获得基因拆分的转基因植物，两个融合基因在转基因植物体内表达后，通过Intein的蛋白剪接功能，将两个无活性的蛋白片段在叶绿体或核基因组中重新组装成有活性的完整蛋白。本发明的方法能降低基因漂流所带来的环境风险。

主权项

一种利用基因拆分控制转基因飘流的方法，其特征在于，包括如下步骤：a、根据目的基因的高级结构或利用接点扫描系统，确定目的基因的可拆分位点，利用PCR方法将目的基因分成N端和C端两部分，并分别与intein的N端和C端连接，形成融合基因片段A和融合基因片段B；b、分别构建融合基因片段A和融合基因片段B的植物表达载体，单独导入受体植物材料，获得转基因植株A和转基因植株B；c、通过抗生素连续多代筛选，获得转基因植株A纯合系和转基因植株B纯合系；d、将转基因植株A纯合系和转基因植株B纯合系杂交，获得同时含有融合基因片段A和融合基因片段B的转基因植株；或者，a’、根据目的基因的高级结构或利用接点扫描系统，确定目的基因的可拆分位点，利用PCR方法将目的基因分成N端和C端两部分，并分别与intein的N端和C端连接，形成融合基因片段A和融合基因片段B；b’、分别构建融合基因片段A和融合基因片段B的植物表达载体，共同导入受体植物材料，获得同时含有融合基因片段A和融合基因片段B的转基因植株；c’通过抗生素连续多代筛选，获得同时含有融合基因片段A和融合基因片段B的转基因植株纯合系；或者，a”、根据目的基因的高级结构或利用接点扫描系统，确定目的基因的可拆分位点，利用PCR方法将目的基因分成N端和C端两部分，并分别与intein的N端和C端连接，形成融合基因片段A和融合基因片段B；b”构建融合基因片段A的核转化用植物表达载体，融合基因片段B的叶绿体转化用植物表达载体，并分别导入受体植物材料的核基因组和叶绿体基因组，获得转基因植株A’和转基因植株B’；c”以转基因植株B’为母本、转基因植株A’为父本杂交，获得同时含有融合基因片段A和融合基因片段B的转基因植株；d”、通过抗生素连续多代筛选，获得同时含有融合基因片段A和融合基因片段B的转基因植株纯合系；