[发明专利]一种简单、快速制备即用esiRNA的方法

摘要

本发明涉及小RNA的制备方法，特别涉及一种简单、快速、低成本的制备即用(ready-to-use)esiRNA的新方法。本发明采用集成了高分子微球(高分子块体)的芯片对esiRNA进行简单、快速、低成本地制备，利用这个芯片在聚合物支架上进行扩增、转录和酶消化，从而简化了液体转移和纯化等操作步骤，将esiRNA的制备方法由现有技术的6个步骤缩减为本发明的3个步骤，大大简化了esiRNA的制备过程；同时，利用该芯片可以对esiRNA产物的量进行裁剪和归一化，使得esiRNA无需进一步的处理就可以直接用于基因沉默导致的功能丧失(loss-of-function)研究。

主权项

一种制备esiRNA的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)准备两块核酸芯片，按照使用先后顺序分别称为第一核酸芯片和第二核酸芯片，上述核酸芯片具有一个刚性基板，在该基板上并列固定多个刚性长条，在刚性长条未与基板接触的一端设置高分子块体，该高分子块体材料具有能与DNA分子反应生成化学键的化学基团，将含有DNA探针分子的溶液与上述高分子块体接触，使DNA探针分子与高分子块体发生化学反应生成化学键而固定化到高分子块体上；(2)将第一核酸芯片上的高分子块体浸入到PCR扩增溶液中进行扩增反应，扩增产物DNA在反应过程中与高分子块体上的DNA探针结合而固定化到高分子块体上，反应结束后取出第一核酸芯片，洗涤高分子块体；(3)将高分子块体浸入到转录溶液中进行转录反应，反应结束后取出第一核酸芯片，将第二核酸芯片上的高分子块体浸入到上述转录溶液中，使转录溶液中的RNA产物与第二核酸芯片高分子块体上的DNA探针杂交而固定化到高分子块体上，结束后取出第二核酸芯片，洗涤高分子块体；(4)将高分子块体浸入到酶消化溶液中，在酶的作用下将固定化在高分子块体上的长链RNA消化为esiRNA。