[发明专利]一种紫花野菊高效再生体系建立的方法

摘要

本发明涉及一种建立紫花野菊高效再生体系的方法，属于植物生物技术育种领域。以紫花野菊无菌苗叶片为外植体，采用两激素三水平随机区组设计的方法筛选出最佳再生培养基，诱导胚性愈伤组织，经过2-3次继代培养后分化出再生小苗，而后转入生根培养基中生根培养，获得完整植株。本发明首次针对紫花野菊建立了其高频再生体系，为紫花野菊生物技术育种工作提供了理论基础和实验依据，将有效推动菊花生物技术育种进程。

主权项

一种建立紫花野菊高效再生体系的方法，其特征在于按如下步骤实现：a、无菌苗的获得于秋末取紫花野菊脚芽，经清水冲洗，于无菌条件下乙醇脱水，升汞消毒，无菌水冲洗获得脱菌的脚芽，切取带腋芽的茎段，接种于MS+细胞分裂素6‑BA1.0 mg·L‑1+生长素NAA 0.1 mg·L‑1的培养基上诱导腋芽萌发，不定芽长至1‑2cm时切下转入1/2MS的生根培养基获得无菌苗；b、培养条件培养室温度：23±2℃；湿度：50~70%；采用自然散射光，光周期：16h·d‑1；光照强度：1800~2000Lux；c、再生体系的建立1） 叶片最适分化培养基的选择取25d苗龄的无菌苗顶端幼嫩叶片切成5mm2大小，接种于含有细胞分裂素6‑BA与生长素NAA的MS培养基中；每瓶接种8个叶盘，每个处理5瓶，在相同的培养条件下重复3次，观察并记录不同培养基上愈伤组织形成和不定芽分化情况，30d后统计再生率和平均芽数；培养基中含蔗糖3%、琼脂0.7%，pH为5.8;2）叶片发育程度对分化的影响分别取25d苗龄的无菌苗顶端幼叶和近基部成熟叶切成5mm2大小，接种于叶片最适分化培养基上，30d后统计再生率和平均芽数;3）不定芽生根情况叶片诱导产生愈伤组织后，继代培养后转入1/2MS生根培养基中进行生根培养，获得完整植株。