[发明专利]一种紫花野菊高效再生体系建立的方法

权利要求书

1.一种建立紫花野菊高效再生体系的方法，其特征在于按如下步骤实现：

a、无菌苗的获得

于秋末取紫花野菊脚芽，经清水冲洗，于无菌条件下乙醇脱水，升汞消毒，无菌水冲洗获得脱菌的脚芽，切取带腋芽的茎段，接种于MS+细胞分裂素6-BA1.0 mg·L^-1+生长素NAA 0.1 mg·L^-1的培养基上诱导腋芽萌发，不定芽长至1-2cm时切下转入1/2MS的生根培养基获得无菌苗；

b、培养条件

培养室温度：23±2℃；湿度：50~70%；采用自然散射光，光周期：16h·d^-1；光照强度：1800~2000Lux；

c、再生体系的建立

1） 叶片最适分化培养基的选择

取25d苗龄的无菌苗顶端幼嫩叶片切成5mm²大小，接种于含有细胞分裂素6-BA与生长素NAA的MS培养基中；每瓶接种8个叶盘，每个处理5瓶，在相同的培养条件下重复3次，观察并记录不同培养基上愈伤组织形成和不定芽分化情况，30d后统计再生率和平均芽数；培养基中含蔗糖3%、琼脂0.7%，pH为5.8;

2）叶片发育程度对分化的影响

分别取25d苗龄的无菌苗顶端幼叶和近基部成熟叶切成5mm²大小，接种于叶片最适分化培养基上，30d后统计再生率和平均芽数;

3）不定芽生根情况

叶片诱导产生愈伤组织后，继代培养后转入1/2MS生根培养基中进行生根培养，获得完整植株。

2.根据权利要求1所述的一种建立紫花野菊高效再生体系的方法，其特征在于步骤C中（1）的细胞分裂素6-BA 1.0、2.0或3.0 mg·L^-1；生长素NAA0.1、0.5或1.0 mg·L^-1。