[发明专利]一种甲烷氧化细菌菌剂的制备方法和降解煤矿瓦斯的方法

摘要

一种甲烷氧化细菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：A1，采集菌源：A2，浸泡：A3，富集培养：A4，菌种分离：A5，菌种驯化：A6，制备菌剂。还公开一种降解煤矿瓦斯的方法。利用甲烷氧化细菌制成瓦斯降解菌剂，用于煤矿瓦斯气体的降解，是一种通过微生物技术治理煤矿瓦斯的新方法。该方法的推广使用能大幅度降低我国煤矿的瓦斯灾害与事故，挽救更多矿工的生命。

主权项

一种甲烷氧化细菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A1，采集菌源：采集河流、湖泊、湿地、水塘底部的泥样或采集垃圾填埋场已填埋区表层以下5‑25cm深处的湿土样；湿土样用采样铲由土壤上层向下层顺序采集，取离地面5‑25cm处的湿土适量，装入聚乙烯袋子中；样品取好以后，迅速将样品带回实验室，放入冰箱冷藏，以备使用；A2，浸泡：配制2000mL 0.9％的NaC1溶液；取清洗干净并且烘干的装有小玻璃珠的250mL锥形瓶；锥形瓶中加入适量的生理盐水使菌源样品充分浸泡；室温敞口静置至少48h；30℃振荡恒温培养48h后，泥样或湿土样培养液由澄清变得混浊，目的细菌得以扩增；A3，富集培养：取100mL的锥形瓶，灭菌后，加入20mL的液体培养基、1mL的甲醇，并吸取1mL的样品浸液上清液，将其摇匀；然后用橡胶塞塞紧锥形瓶，充入20mL的甲烷气体，用夹子夹紧，放入摇床培养；培养条件为：培养温度t＝30℃，转速r＝120r/min，培养时间T＝48h；A4，菌种分离：取灭过菌的培养皿，以步骤A3泥样富集培养所得菌液为菌源划线；将培养皿盖好并倒置，放入恒温培养箱中，30℃培养48h后，观察其生长情况；A5，菌种驯化：在培养瓶底加入约1cm厚的固体培养基，冷却后，在培养箱中放置48小时，如果没有细菌长出，就可以继续进行试验。在培养瓶中进行划线，然后充入一定浓度的甲烷驯化培养；培养温度为30℃，pH值为7，培养时间48h；A6，制备菌剂：将步骤A5中固体培养驯化出来菌种接种到液体培养基中，利用甲烷纯化并扩大培养，培养48h后，甲烷氧化细菌在斜面上生长，将试管放入冰箱中以保存菌种，制备成菌剂。