[发明专利]一种新的伪狂犬病活疫苗的效力检验方法无效
| 申请号： | 201010588322.4 | 申请日： | 2010-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN102094064A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 贺笋;杜久斌;李延涛;刘淑梅;黄炯;赵钦;赵海源 | 申请（专利权）人： | 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐新科联专利代理事务所(有限公司) 65107 | 代理人： | 欧咏 |
| 地址： | 830032 新疆维吾尔自*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 本发明的一种新的伪狂犬病活疫苗的效力检验方法，其中Vero细胞的制备：抽取密度为2.0×106的Vero细胞1.5ml，置于37℃水浴中，快速晃动溶解4-5分钟，在2000rmp/min条件下，离心5分钟，弃去上清，加入1-3ml细胞培养液，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养48小时后，用浓度0.25%的EDTA-胰酶消化液消化细胞后再用细胞营养液稀释成2.0×106的Vero细胞悬液，铺到细胞板上，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养24小时后长成致密单层备用；抽取1头份伪狂犬病毒活疫苗，用细胞维持液作10倍的梯度稀释，取样分别加入上述的致密单层的96孔细胞板中，每孔加细胞维持液，放入37℃、5％的CO2培养箱中培养，观察3-5天细胞病变，采用Reed-Muench法计算TCID50/0.1ml效价，每头份病毒含量应不低于5×103.0TCID50。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 狂犬病 疫苗 效力 检验 方法 | ||
【主权项】：
一种新的伪狂犬病活疫苗的效力检验方法，其特征在于：采用Vero细胞测定伪狂犬病毒活疫苗TCID50的方法，分步如下；其中Vero细胞的制备： 抽取密度为2.0×106的Vero冻存细胞1.5ml，置于37℃水浴中，晃动溶解4‑5分钟，在2000rmp/min条件下，离心5分钟，弃去上清，加入1‑3ml细胞培养液，转入培养瓶中，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养48小时后，用浓度0.25%的EDTA‑胰酶消化细胞，再用细胞营养液稀释成2.0×106的Vero细胞悬液，铺到细胞板上，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养24小时成致密单层备用；其中伪狂犬病活疫苗的接种：抽取1头份伪狂犬病活疫苗，用细胞维持液作10倍的梯度稀释，取10‑3‑10‑7的滴度样，分别加入上述的致密单层中，每孔100ul，同时设对照每孔加细胞维持液100ul，放入37℃、5％的CO2培养箱中培养，观察3‑5天细胞病变，计算TCID50/0.1ml效价，每头份病毒含量应不低于5×103.0TCID50。
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