[发明专利]一株产精氨酸脱亚胺酶的重组菌的构建及其定向改造方法有效
| 申请号： | 201010572851.5 | 申请日： | 2010-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN102061283A | 公开（公告）日： | 2011-05-18 |
| 发明（设计）人： | 倪晔;孙志浩;郑璞 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/55;C12N9/78;C12R1/38 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一株产精氨酸脱亚胺酶（ADI）的重组菌的构建及其定向改造方法，属于医药生物工程技术领域。其中包括：采用PCR方法，扩增变形假单胞菌（Pseudomonas plecoglossicida）CGMCC No.2039的ADI编码基因arcA，构建ADI重组表达菌种，对该重组ADI酶进行酶学性质研究，其Km为2.88mmol/L（pH6.0），最适反应pH为6.0，比酶活为20.85U/mg，当pH升高至生理pH（7.4）时，比酶活下降超过90%。采用易错PCR突变技术，对该重组ADI酶进行定向改造以提高其在生理中性条件pH下的活性及底物亲和力。通过一轮定向改造，筛选获得一株优良的突变株ADIM314，ADIM314酶和野生酶相比：其生理pH条件下比酶活提高20倍以上，Km值下降至0.65mmol/L（pH7.4），最适反应pH从6.0提高至6.5。 | ||
| 搜索关键词： | 一株产 精氨酸 亚胺 重组 构建 及其 定向 改造 方法 | ||
【主权项】：
一种产精氨酸脱亚胺酶的重组菌的构建方法，其特征在于：（1）由产精氨酸脱亚胺酶ADI的变形假单胞菌（Pseudomonas plecoglossicida）CGMCC No.2039，扩增ADI的编码基因arcA；（2）将arcA基因连接在表达质粒pET24a上，酶切位点为Nde I及Xho I，获得重组质粒pET24a‑ADI；（3）将重组质粒pET24a‑ADI转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得产ADI的大肠杆菌重组菌；该重组菌产生的重组ADI基因全长1254bp，编码417个氨基酸，蛋白质分子量为92.6kDa，由两个相同的亚基组成。
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