[发明专利]PLGA微球作为核酸疫苗载体的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种PLGA微球作为基因疫苗载体的制备方法和应用。通过动物免疫实验证实了这种微球可以作为基因疫苗载体。1.微球为核壳结构，表面的聚合物包含聚乙烯亚胺、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、葡聚糖、壳聚糖、聚赖氨酸、FeCl3和FeCl2几种聚合物，可以通过静电、疏水相互作用、氢键与核酸疫苗作用，浓缩核酸疫苗成为致密状态，减少其体内降解。2.该微球具有磁性，免疫注射后，在外界强磁场的作用下，增加其在肌肉组织中的分布，弥补与靶细胞接触有限的缺陷。3.长时间强磁场诱导可以导致磁性微球/核酸疫苗复合物到达皮内，皮内含有丰富的抗原提呈细胞，可诱导更快更强有力的免疫反应。

主权项

PLGA微球作为核酸疫苗载体的应用，其特征包括：(I)具有强磁性的四氧化三铁内核的强磁性的纳米微粒的制备：将FeCl3和FeCl2的溶液按照摩尔比1∶2混合(Fe2+略微过量)，在氮气氛下，60℃水浴30min后，快速加一定浓度的氨水，恒温继续反应30min。反应完毕后，利用商用永磁铁吸附生成的Fe3O4黑色颗粒，倾去上层清液，用高纯水多次洗涤，其反应方程式：Fe2++2Fe3++8OH‑→Fe3O4+4H2O；向所得到的磁流体沉淀中加入含有聚合物的水溶液，重悬磁流体后放置30min，然后磁分离。重复3次后，定容于pH7.2的PBS中。(II)聚合物的选择：包含聚乙烯亚胺(PEI)、乳酸‑乙醇酸共聚物(PLGA)、葡聚糖、壳聚糖(chitosan)、聚赖氨酸(Polylysine)等。(III)磁微球与核酸疫苗的结合：在固定的缓冲体系里(1×TAE)，核酸疫苗的质量恒定，向里面加入不同质量的磁性纳米颗粒，其中磁性纳米颗粒与DNA(w/w)的质量比为大于0小于等于4，4℃放置30min。