[发明专利]抑制Ppif基因的表达减轻肾缺血再灌注损伤的试验方法

摘要

本发明涉及生物化学领域，特别是一种抑制Ppif基因的表达减轻肾缺血再灌注损伤的试验方法。本发明所述的试验方法针对3个不同干扰靶点，提取大鼠肾细胞(normal rat kidney cells，NRK)Ppif进行抑制试验，体外观察沉默Ppif基因对大鼠肾细胞(NRK)增值和凋亡的影响，能够为针对大鼠Ppif基因的靶向治疗提供试验基础，本发明在缺血再灌注损伤机制和治疗2个方面，将研究的层次上由分子生物学水平提高到了基因水平，且应用的范围广，所有与缺血再灌注损伤有关的疾病，比如应用于肾移植，心肌梗死，脑血管意外等均可以使用该项成果。

主权项

一种抑制Ppif基因的表达减轻肾缺血再灌注损伤的试验方法，其特征在于：具体试验步骤如下：(1)、提取大鼠Ppif基因，即NM_172243基因为靶基因，根据RNA干扰RNAi序列设计原则，设计4对有小发夹结构的RNAi靶点序列，退火形成双链DNA，双酶切后定向克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL‑Ppif中，构建4个含靶基因片段的重组慢病毒载体转移质粒pGCL‑Ppif，并对质粒进行PCR及测序鉴定。(2)、4个含Ppif靶基因片段的慢病毒载体转移质粒构建成功后，从这4个片段中筛选有效的RNAi靶点序列，即4个靶点不一定都有效，要从中筛选出可以抑制Ppif基因的靶点。(3)、将筛选出来的慢病毒载体转移质粒pGCL‑Ppif进行慢病毒的包装，此时介导Ppif基因沉默的慢病毒载体全部完成，此时得到的是一种试剂，可以理解为一种药物，可以用来注射动物，进行抑制Ppif基因的功能实验。(4)、用pGCL‑Ppif注射大鼠，检测其对肾缺血再灌注损伤的抑制效果。