[发明专利]一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法

摘要

一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，它涉及一种单克隆抗体的制备方法。本发明解决了现有紫杉醇微生物发酵的菌株的紫杉醇产量仍然较低，且发酵液中杂质含量多，难以分离提取的问题。方法：一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的紫杉醇免疫原免疫Balb/c小鼠，取其效价高且特异性强的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合，培养并筛选出细胞株；三、将细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，得高浓度的单克隆抗体即完成。本发明抗紫杉醇单克隆抗体的产量高达1∶12800，发酵液中杂质含量少，分离提取简单，为从内生真菌发酵液中迅速、高效地分离、提取和纯化紫杉醇，为早日实现工业化生产奠定了基础。

主权项

一种抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法，其特征在于抗紫杉醇单克隆抗体的制备方法按以下步骤实现：一、紫杉醇人工抗原的合成与鉴定；二、利用合成的紫杉醇免疫原免疫Balb/c小鼠，取其效价高且特异性强的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，培养并筛选出具有分泌特异性抗体的细胞株；三、将筛选的细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，获得高浓度的单克隆抗体，即完成抗紫杉醇单克隆抗体的制备；其中步骤二中免疫Balb/c小鼠：取体重为10～12g的12周龄雌性Balb/c小鼠6只进行免疫；首次免疫采用Taxol‑BSA与等量福氏完全佐剂混合，注射器互推法乳化完全后，进行背部皮下多点注射，剂量为每只80μg；3周后进行第二次免疫，以后每隔二周加强免疫一次，换用Taxol‑BSA与福氏不完全佐剂等量混合，进行背部皮下多点注射；第三次免疫后，小鼠断尾取血，用间接ELISA法检测血清效价，直至血清效价达到1∶4000～10000；融合前三天，不加佐剂，小鼠尾静脉注射进行强化免疫；步骤三将筛选的细胞株注入小鼠腹腔，收获腹水，获得高浓度的单克隆抗体的具体步骤如下：取体重为10～12g的12周龄的Balb/c小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂每只0.4mL；7d后每只小鼠腹腔注射5×105个杂交瘤细胞；7～10d，待小鼠腹部明显隆起时，取腹水，2000r/min离心10min去除最上层的脂肪组织，吸取上清分装，冻存于‑20℃；采用辛酸‑饱和硫酸铵法提纯单克隆抗体。