[发明专利]壳聚糖-量子点荧光探针标记狗肾细胞的方法

摘要

本发明公开了一种壳聚糖-量子点荧光探针标记狗肾细胞的方法，其步骤是：A、配制羧甲基壳聚糖-CdTe量子点溶液：根据羧甲基壳聚糖-CdTe量子点的浓度，用移液管移取羧甲基壳聚糖-CdTe量子点溶液于灭菌的容量瓶中，加入高纯水定容；B、将T25细胞培养瓶中已长满的狗肾细胞用EDTA-胰蛋白酶消化为单细胞悬浮液，细胞计数后取狗肾细胞接种到到细胞培养皿中，加入营养液，培养；C、待狗肾细胞贴壁生长后，向培养皿中加入壳聚糖-量子点荧光探针，与狗肾细胞共同孵育，得到已标记上荧光的狗肾细胞。本发明操作简便，荧光效率高、生物相容性好、稳定时间长，荧光探针无细胞毒性，可用于细胞的长时间的观测。

主权项

一种壳聚糖‑量子点荧光探针标记狗肾细胞的方法，其步骤是：A、配制0.0000025‑0.001mol/L的羧甲基壳聚糖‑CdTe量子点溶液：根据羧甲基壳聚糖‑CdTe量子点的浓度，用移液管移取0.1~5ml的羧甲基壳聚糖‑CdTe量子点溶液于灭菌的10ml容量瓶中，加入高纯水，电阻率大于 18 MΩ·cm，定容，备用；B、将T25细胞培养瓶中已长满的狗肾细胞用0.05%体积比的EDTA‑胰蛋白酶消化为单细胞悬浮液，细胞计数后取1×104~1×107的狗肾细胞接种到到细胞培养皿中，加入含10%体积比的胎牛血清的DMEM营养液，在37℃、5%体积比的CO2细胞培养箱中培养，使细胞正常贴壁生长繁育，得到用于实施标记的狗肾细胞；C、待步骤（B）狗肾细胞贴壁生长12~36小时后，向培养皿中加入壳聚糖‑量子点荧光探针，于37℃、5%体积比的CO2细胞培养箱中与细胞共同孵育6~48小时，得到带有荧光的狗肾细胞，弃去营养液，用pH=7.4磷酸盐缓冲溶液洗涤2次，用荧光显微镜观察标记情况。