[发明专利]一种乙酰胆碱酯酶的提取方法及其应用

摘要

本发明公开了一种乙酰胆碱酯酶的提取方法，本发明以家蚕为酶源，其工艺步骤包括从酶源中提取乙酰胆碱酯酶粗提液，以及用硫酸铵沉淀法纯化乙酰胆碱酯酶和用透析法脱硫酸铵，再将酶液浓缩，干燥，即得已纯化的乙酰胆碱酯酶制品。本发明所提供的乙酰胆碱酯酶的提取方法，其家蚕原料来源广泛，制备工艺简单稳定，生产成本较低。用本发明方法所制备的乙酰胆碱酯酶产品，产品纯度高，用于对残留农药的检测，具有较高灵敏度，经测定检出极限为95～100μg／mL，且经本发明纯化后的乙酰胆碱酯酶灵敏度比酶粗提液提高4倍以上。

主权项

一种乙酰胆碱酯酶的提取方法，其特征在于包括下列步骤：(1)、将家蚕饥饿18‑24h后，洗净并吸干表面水分，以1：5的比例剪取家蚕头部于pH7.5～8.0磷酸缓冲液中，冰浴匀浆，匀浆液于4℃、5000‑15000r.p.m离心20～30min，取其上清液，即得乙酰胆碱酯酶粗提液；(2)、用硫酸铵沉淀法纯化乙酰胆碱酯酶a、在冰浴中边缓慢搅拌乙酰胆碱酯酶粗提液，边加入硫酸铵，使酶液中硫酸铵的饱和度在30‑80％的范围内；b、上述所得溶液于0～4℃、5000～15000r.p.m冷冻离心10min，保留沉淀；c、再加入pH7.5‑8.0的磷酸缓冲液小心溶解沉淀，并用pH7.5‑8.0磷酸缓冲液稀释2‑10倍；(3)、用透析法脱硫酸铵将步骤（2）经过硫酸铵沉淀的酶液装入透析袋中，用其体积20‑30倍的蒸馏水透析，直至透析液不产生沉淀为止；(4)、将步骤（3）所得的酶液浓缩，干燥，即得已纯化的乙酰胆碱酯酶制品。