[发明专利]一种山乌龟的离体快速繁殖方法

摘要

本发明提供一种山乌龟的离体快速繁殖方法，经过外植体的选择、外植体灭菌、不定芽诱导培养、不定芽增殖培养、继代培养、生根培养、过渡移栽等工艺步骤，在所对应的各种培养基上进行培养，炼苗后直接移栽即可。进种率可达90％，移栽成活率在85％以上。该方法解决了山乌龟用常规方法繁殖能力差，繁殖速度慢的难题，建立了山乌龟无菌繁殖技术体系。达到了进种效率高，增殖速度快的目的。实现了山乌龟优良品种种苗的规模化和标准化生产。

主权项

一种山乌龟的离体快速繁殖方法，其特征在于经过以下工艺步骤：A、选择体积硕大、形状优美、芽眼较多的山乌龟块根，栽种于室内珍珠岩中至长出新梢，并切下该新梢作为外植体，去掉叶片，切成2～3cm长的茎段，用常规的加有适量洗涤剂的水清洗茎段，再用清水洗净，用质量浓度为0.1％的升汞溶液消毒1～4min，用无菌水漂洗3～4次，得无菌茎段；B、将A步骤的无菌茎段接种于下列诱导培养基中：MS培养基6‑苄胺基嘌呤(6‑BA)            0.5～1.0mg/L2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑D)     0～0.05mg/L萘乙酸(NAA)                   0～0.05mg/L琼脂                          6.5g/L白糖                          30g/LpH值                          5.8～6.0在培养温度为22～28℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，诱导培养16～30天，在茎段基部萌发出1～4个不定芽；C、将B步骤的不定芽切下，接于下列增殖培养基中：MS培养基6‑苄胺基嘌呤(6‑BA)            1.0～2.0mg/L2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑D)     0.02～0.04mg/L萘乙酸(NAA)                   0.02～0.04mg/L琼脂                          6.5g/L白糖                30g/LpH值                5.8～6.0在培养温度为22～28℃，光照强度为2000～2500Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，增殖培养20～25天，每个不定芽新增殖1～9个增殖芽，切下新增的高度为2～5cm的增殖芽，接种在新的与本步骤相同的增殖培养基中，按本步骤相同的培养条件继续增殖培养，如此继代培养至获得足够量的增殖芽；D、将C步骤的增殖芽按节切成2～3cm长的茎段，接种在下列继代培养中：3‑吲哚丁酸(IBA)     0.1～0.3mg/L萘乙酸(NAA)         0.1～0.3mg/L琼脂                6.5g/L白糖                30g/LpH值                5.8～6.0在与C步骤相同的培养条件下进行壮苗培养，得健壮、带叶的丛生苗；E、将D步骤的丛生苗分成单株，接入下列生根培养基中：1/2MS培养基6‑苄胺基嘌呤(6‑BA)  0～0.2mg/L3‑吲哚丁酸(IBA)     0～1.0mg/L萘乙酸(NAA)         0～1.0mg/L琼脂                7.0g/L白糖                30g/LpH值                5.8～6.0在培养温度为22～28℃，光照强度为2000～2500Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，培养15～20天，得生根苗；F、将E步骤的生根苗在室外散射光下锻炼5～7天，取苗，用清水洗净苗上培养基，放入0.1％多菌灵溶液中消毒1～2分钟，移栽至装有红土∶河沙∶珍珠岩＝1∶1∶1质量比基质的育苗袋中，并在基质表面撒上适量腐殖土，按常规浇水、施肥、病虫害防治管理，成活率达85％以上，当苗长至3～5cm高，并生出大量须根时，即得到种植苗。