[发明专利]一种山乌龟的离体快速繁殖方法

权利要求书

1.一种山乌龟的离体快速繁殖方法，其特征在于经过以下工艺步骤：

A、选择体积硕大、形状优美、芽眼较多的山乌龟块根，栽种于室内珍珠岩中至长出新梢，并切下该新梢作为外植体，去掉叶片，切成2～3cm长的茎段，用常规的加有适量洗涤剂的水清洗茎段，再用清水洗净，用质量浓度为0.1％的升汞溶液消毒1～4min，用无菌水漂洗3～4次，得无菌茎段；

B、将A步骤的无菌茎段接种于下列诱导培养基中：

MS培养基

6-苄胺基嘌呤(6-BA)            0.5～1.0mg/L

2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)     0～0.05mg/L

萘乙酸(NAA)                   0～0.05mg/L

琼脂                          6.5g/L

白糖                          30g/L

pH值                          5.8～6.0

在培养温度为22～28℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，诱导培养16～30天，在茎段基部萌发出1～4个不定芽；

C、将B步骤的不定芽切下，接于下列增殖培养基中：

MS培养基

6-苄胺基嘌呤(6-BA)            1.0～2.0mg/L

2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)     0.02～0.04mg/L

萘乙酸(NAA)                   0.02～0.04mg/L

琼脂                          6.5g/L

白糖                30g/L

pH值                5.8～6.0

在培养温度为22～28℃，光照强度为2000～2500Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，增殖培养20～25天，每个不定芽新增殖1～9个增殖芽，切下新增的高度为2～5cm的增殖芽，接种在新的与本步骤相同的增殖培养基中，按本步骤相同的培养条件继续增殖培养，如此继代培养至获得足够量的增殖芽；

D、将C步骤的增殖芽按节切成2～3cm长的茎段，接种在下列继代培养中：

3-吲哚丁酸(IBA)     0.1～0.3mg/L

萘乙酸(NAA)         0.1～0.3mg/L

琼脂                6.5g/L

白糖                30g/L

pH值                5.8～6.0

在与C步骤相同的培养条件下进行壮苗培养，得健壮、带叶的丛生苗；

E、将D步骤的丛生苗分成单株，接入下列生根培养基中：

1/2MS培养基

6-苄胺基嘌呤(6-BA)  0～0.2mg/L

3-吲哚丁酸(IBA)     0～1.0mg/L

萘乙酸(NAA)         0～1.0mg/L

琼脂                7.0g/L

白糖                30g/L

pH值                5.8～6.0

在培养温度为22～28℃，光照强度为2000～2500Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，培养15～20天，得生根苗；

F、将E步骤的生根苗在室外散射光下锻炼5～7天，取苗，用清水洗净苗上培养基，放入0.1％多菌灵溶液中消毒1～2分钟，移栽至装有红土∶河沙∶珍珠岩＝1∶1∶1质量比基质的育苗袋中，并在基质表面撒上适量腐殖土，按常规浇水、施肥、病虫害防治管理，成活率达85％以上，当苗长至3～5cm高，并生出大量须根时，即得到种植苗。