[发明专利]一种山乌龟的离体快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物快速繁殖方法，尤其是山乌龟的离体快速繁殖方法，属于植物栽培技术领域。

背景技术

山乌龟是我国传统中药，主要分布于我国云南、贵州、四川等地。由于其肉质块根古雅、奇特，果实玲珑，叶色清秀，植株外形别致可爱，因此，除了用作药材外，还可作为极具观赏价值的盆栽植物，或者园林、绿化用植物。山乌龟植物最具药用价值的是其硕大的根块，其成分中富含生物碱，随着新分离技术和高灵敏检测仪器的出现，大量的生物碱被分离出来，含量高达3％～4％，在临床上被广泛用于抗菌消炎、镇静、理气止痛等，同时山乌龟根块是颅痛定的主要生产原料。随着山乌龟的药用价值和观赏价值被不断发掘，市场对山乌龟的需求时也逐渐加大。然而由于山乌龟为雌雄异株，且种子小，种壳坚硬，在自然条件下萌发较为困难，因此繁殖能力极差，加上近年来受人为造成的环境因素影响，使山乌龟的种群及个体数量急剧减少。仅通过传统的播种、分块的方法，远不能满足日益增长的市场需求。因此，需要研发出新的成本低、时间短、成活率高的无性繁殖体系，以扩大山乌龟繁殖量，实现山乌龟的产业化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种山乌龟的组织培养与快速繁殖方法，以建立山乌龟种群，扩大山乌龟繁殖量，提高增殖率及生根率，为山乌龟的规模化、产业化生产提供优质种苗。

为实现上述目的，本发明提供这样一种山乌龟的离体快速繁殖方法，其特征在于经过以下工艺步骤：

A、选择体积硕大、形状优美、芽眼较多的山乌龟块根，栽种于室内珍珠岩中至长出新梢，并切下该新梢作为外植体，去掉叶片，切成2～3cm长的茎段，用常规的加有适量洗涤剂的水清洗茎段，再用清水洗净，用质量浓度为0.1％的升汞溶液消毒1～4min，用无菌水漂洗3～4次，得无菌茎段；

B、将A步骤的无菌茎段接种于下列诱导培养基中：

MS培养基

6-苄胺基嘌呤(6-BA)          0.5～1.0mg/L

2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)   0～0.05mg/L

萘乙酸(NAA)                 0～0.05mg/L

琼脂                        6.5g/L

白糖                        30g/L

pH值                        5.8～6.0

在培养温度为22～28℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，诱导培养16～30天，在茎段基部萌发出1～4个不定芽；

C、将B步骤的不定芽切下，接于下列增殖培养基中：

MS培养基

6-苄胺基嘌呤(6-BA)          1.0～2.0mg/L

2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)   0.02～0.04mg/L

萘乙酸(NAA)                 0.02～0.04mg/L

琼脂                        6.5g/L

白糖                        30g/L

pH值                        5.8～6.0

在培养温度为22～28℃，光照强度为2000～2500Lx，光照时间为8～12h/d的条件下，增殖培养20～25天，每个不定芽新增殖1～9个增殖芽，切下新增的高度为2～5cm的增殖芽，接种在新的与本步骤相同的增殖培养基中，按本步骤相同的培养条件继续增殖培养，如此继代培养至获得足够量的增殖芽；

D、将C步骤的增殖芽按节切成2～3cm长的茎段，接种在下列继代培养中：

3-吲哚丁酸(IBA)             0.1～0.3mg/L

萘乙酸(NAA)                 0.1～0.3mg/L

琼脂                        6.5g/L

白糖                        30g/L

pH值                        5.8～6.0

在与C步骤相同的培养条件下进行壮苗培养，得健壮、带叶的丛生苗；

E、将D步骤的丛生苗分成单株，接入下列生根培养基中：

1/2MS培养基

6-苄胺基嘌呤(6-BA)          0～0.2mg/L