[发明专利]人类白细胞抗原HLA-A、B基因全长序列测定以及HLA基因测序分型方法无效
| 申请号： | 201010268649.3 | 申请日： | 2010-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN101962676A | 公开（公告）日： | 2011-02-02 |
| 发明（设计）人： | 徐筱娉;邓志辉;王大明;高素青 | 申请（专利权）人： | 深圳市血液中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市中知专利商标代理有限公司 44101 | 代理人： | 成义生;罗永前 |
| 地址： | 518035 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种人类白细胞抗原HLA-A、B基因全长序列测定以及HLA基因测序分型方法，其中，HLA-A、-B基因全长序列测定方法包括a、各由一对引物对HLA-A、B基因约4kb全长序列进行PCR扩增；b、将扩增产物克隆至pGEM-Tea sy载体中，分别通过正、反双向十条步移测序引物将全长序列测通，共获得HLA-A 38种等位基因4.3kb全长序列，HLA-B30种等位基因3.7kb全长序列。HLA-A、-B测序分型方法为：将HLA-A、-B分别由两对引物对分型目的区域进行PCR扩增；分别通过十四条测序引物对产物进行双向测序；HLA-DRB1、-DQB1的测序分型方法为：分别采用组特异性引物扩增DRB1及DQB1的第2、3外显子的序列。采用八条组特异性引物与三条测序引物对DRB1的第2、3外显子进行双向测序，采用四条测序引物分别对DQB1第2、3外显子进行双向测序。 | ||
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【主权项】：
一种人类白细胞抗原HLA‑A、‑B基因全长序列测定方法，其特征在于，该方法包括：a、各由一对位点特异性PCR扩增引物对HLA‑A基因的4.3kb全长序列，HLA‑B基因的3.7kb全长序列进行PCR扩增，扩增采用高保真的聚合酶(Pfuultra II Fusion HS DNA polymerase)，扩增区域包含两个基因的5’‑启动子序列，所有外显子，所有内含子，以及3’‑UTR序列；b、将HLA‑A 4.3kb扩增产物以及HLA‑B 3.7kb扩增产物进行末端加碱基‘A’反应并克隆至pGEM‑Teasy载体当中，挑选阳性克隆、提取质粒、分别通过载体两端引物以及正、反双向十条保守步移测序引物将两个基因的全长序列测通，共获得中国汉族个体HLA‑A 38种等位基因的4.3kb全长序列，HLA‑B 30种等位基因的3.7kb全长序列。
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