[发明专利]一种适用于病毒PCR检测的标准品的制备方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于病毒PCR检测的标准品的制备方法。本发明的步骤包括：筛选扩增特定长度片段的大肠杆菌引物；设计包含病毒特异性引物和大肠杆菌引物的合并引物；使用合并引物扩增大肠杆菌基因组；构建包含病毒特异性引物的定量标准品质粒。已构建的标准品质粒的病毒包括肠道病毒，甲肝病毒、手足口病毒、诺瓦克病毒、轮状病毒、人星状病毒、戊肝病毒等。本发明可避免用多种病毒株构建相关病毒标准品过程，减少制备中的潜在危险性，并可快速、同时制备不同病毒质粒标准品。本发明可应用于水体中致病病毒和其它病原体的检测。

主权项

一种用于病毒PCR检测的标准品的制备方法，其特征在于具体步骤如下：1）根据病毒引物的扩增片段大小，筛选合适的大肠杆菌16S rRNA基因引物；    2）设计包含病毒特异性引物和大肠杆菌引物的合并引物；    3）用合并引物扩增大肠杆菌16S rRNA基因片段；    4）制备病毒PCR检测标准品质粒；    所述步骤1），是根据已知病毒的引物对该病毒基因组扩增片段的大小，通过软件寻找在大肠杆菌16S rRNA基因中扩增相近片段长度的合适引物；    所述部骤2），是将病毒和大肠杆菌的上游引物和两者的下游引物分别进行合并，通过软件筛选出扩增效率最佳的合并引物；    所述部骤3），是以大肠杆菌基因组为模板，用设计的合并引物扩增大肠杆菌16S rRNA基因，得到两端带有病毒引物的16S rRNA基因片段；    所述部骤4），是利用DNA重组技术将带有病毒引物的16S rRNA基因片段克隆到载体中，构建的重组质粒作为检测该病毒的PCR检测的标准品；    所述的病毒标准品质粒，包括肠道病毒、甲肝病毒、手足口病毒、诺瓦克病毒、轮状病毒、人星状病毒、戊肝病毒的标准品质粒，还包括其它致病细菌和真菌的标准品。