[发明专利]乳酸乳球菌和嗜热链球菌中胆盐水解酶的提取方法

摘要

本发明名称为乳酸乳球菌和嗜热链球菌中胆盐水解酶(BSH)和胞外多糖(EPS)的提取方法，适用于功能性乳制品中BSH、EPS作为功能因子及EPS作为天然稳定剂，开发生产新型的功能食品。本发明利用高产BSH和EPS的乳酸乳球菌乳酸亚种KS4(CGMCC №1807)、嗜热链球菌Tx(CGMCC №1810)，通过优化发酵条件和提取方法得到乳酸菌胆盐水解酶和胞外多糖粗品。采用适宜的超声波细胞破碎提取方法，解决了胞内胆盐水解酶较难提取的问题；通过优化EPS的提取条件，提高了EPS的提取率。本发明制得BSH和EPS的发酵工艺与提取方法简单，发酵周期较短，对设备要求低，成本较低，适于工业化生产。

主权项

一种利用乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)KS4CGMCC No.1807，嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)Tx CGMCCNo.1810提取胆盐水解酶的方法，其特征在于：所述乳酸菌的发酵液以10000r/min，4℃离心10min，收集沉淀菌泥；用生理盐水离心洗涤菌体沉淀2次，条件同上；加入0.1mol/L的pH6.5的磷酸盐缓冲液至发酵液原体积，细胞悬浮液于冰浴中进行超声波破碎10min，功率400～450w，工作5s，间歇3s；以10000r/min，4℃离心10min，除去细胞碎片，收集含胆盐水解酶的上清液；上清液用70％～75％饱和浓度的硫酸铵于4℃盐析24h，以10000r/min，4℃离心15～20min，收集沉淀的蛋白物质；以0.1mol/L的pH6.5的磷酸盐缓冲液溶解蛋白物质，用预处理的透析袋于4℃透析至透析液经BaCl2检验无沉淀为止，透析液即为胆盐水解酶提取液；将50mL或100mL的胆盐水解酶提取液注入500mL无菌冻干瓶内，在‑25℃条件下16～24h预冻至冻结状态，在美国产LABCONCO冷冻真空干燥机上于0.22～0.24mBar真空度、冷阱温度为‑55℃条件下升华干燥36～72h，其干燥物即为乳酸菌胆盐水解酶粗制品。