[发明专利]乳酸乳球菌和嗜热链球菌中胆盐水解酶的提取方法有效
| 申请号： | 201010185950.8 | 申请日： | 2007-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN101892205A | 公开（公告）日： | 2010-11-24 |
| 发明（设计）人： | 刘慧;张红星;钟德寿;艾启俊;董瑞婷 | 申请（专利权）人： | 北京农学院 |
| 主分类号： | C12N9/14 | 分类号： | C12N9/14;C12P19/04;C12R1/01;C12R1/46 |
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| 地址： | 102206 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乳酸 球菌 链球菌 盐水 提取 方法 | ||
1.一种利用乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)KS4CGMCC No.1807，嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)Tx CGMCCNo.1810提取胆盐水解酶的方法，其特征在于：所述乳酸菌的发酵液以10000r/min，4℃离心10min，收集沉淀菌泥；用生理盐水离心洗涤菌体沉淀2次，条件同上；加入0.1mol/L的pH6.5的磷酸盐缓冲液至发酵液原体积，细胞悬浮液于冰浴中进行超声波破碎10min，功率400～450w，工作5s，间歇3s；以10000r/min，4℃离心10min，除去细胞碎片，收集含胆盐水解酶的上清液；上清液用70％～75％饱和浓度的硫酸铵于4℃盐析24h，以10000r/min，4℃离心15～20min，收集沉淀的蛋白物质；以0.1mol/L的pH6.5的磷酸盐缓冲液溶解蛋白物质，用预处理的透析袋于4℃透析至透析液经BaCl2检验无沉淀为止，透析液即为胆盐水解酶提取液；将50mL或100mL的胆盐水解酶提取液注入500mL无菌冻干瓶内，在-25℃条件下16～24h预冻至冻结状态，在美国产LABCONCO冷冻真空干燥机上于0.22～0.24mBar真空度、冷阱温度为-55℃条件下升华干燥36～72h，其干燥物即为乳酸菌胆盐水解酶粗制品。
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