[发明专利]一种单链微核糖核酸的检测方法

摘要

本发明涉及一种单链微核糖核酸的检测方法，属于生物检测技术领域。使用细胞或组织核糖核酸(含有miRNA)，其中的miRNA经过多聚腺苷酸聚合酶在其3’端加上多聚腺苷酸尾巴，再由逆转录引物进行逆转录获得核糖核酸互补单链脱氧核糖核酸，最后以miRNA相关序列和逆转录引物的部分互补序列分别作为miRNA检测的上下游引物，使用特定的检测系统(含SYBR Green I荧光染料)来检测miRNA。本方法具有简便、快速和适于大量样本检测的优点。本方法可用于miRNA的表达分析、克隆研究以及临床标本检验。

主权项

一种单链微核糖核酸的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将包含单链微核糖核酸的核糖核酸加入到多聚腺苷酸聚合酶反应系统中，在37℃反应50-70分钟，得到反应液，所述的多聚腺苷酸聚合酶反应系统的体积为20微升，核糖核酸加入的质量体积比为2纳克～200纳克/微升，多聚腺苷酸聚合酶反应系统的组成为：多聚腺苷酸聚合酶为2单位、核糖核酸为20纳克～2微克、pH值为8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐100毫摩尔/升、氯化钠200毫摩尔/升、乙二胺四乙酸80毫摩尔/升和三磷酸腺苷为50毫摩尔/升；(2)从步骤(1)的反应液中取出2微升，加入到逆转录反应系统中，在37℃反应50-70分钟，得到反应液，逆转录反应系统的体积为20微升，步骤(1)的反应液的加入体积比为1∶10，逆转录反应系统的组成为：步骤(1)的反应液2微升、逆转录引物150纳摩尔/升、pH值为8.8的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐150毫摩尔/升、氯化钾500毫摩尔/升、三磷酸脱氧核糖核苷为100微摩尔/升、核糖核酸酶抑制剂为20单位和Quant逆转录酶为2单位；(3)从步骤(2)的反应液中取出2微升，加入到聚合酶链式反应系统中，反应程序为40个热循环，每个热循环的条件为94℃保温20秒，60℃保温30秒，72℃保温30秒，步骤(2)反应液的加入体积比为1∶10，聚合酶链式反应系统的组成为：步骤(2)的反应液2微升、脱氧核糖核酸聚合酶混合液10微升、上游引物摩尔浓度为200纳摩尔/升和通用型下游引物摩尔浓度为200纳摩尔/升。