[发明专利]高密度脂蛋白芯片电泳方法无效
申请号: | 200910182262.3 | 申请日: | 2009-07-06 |
公开(公告)号: | CN101614696A | 公开(公告)日: | 2009-12-30 |
发明(设计)人: | 王惠民;郑慧斐;金庆辉;丛辉 | 申请(专利权)人: | 南通大学附属医院 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447;B01D57/02 |
代理公司: | 南通市永通专利事务所 | 代理人: | 葛 雷 |
地址: | 226001*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种高密度脂蛋白芯片电泳方法,包括选择缓冲体系、选择电泳芯片、血清标本及标记、电泳等步骤。本发明基于芯片电泳技术结合激光诱导荧光检测系统,在4分钟内分离了血清HDL的两种亚类,弥补了血液生化常规分析方法无法对HDL亚类进行分析的不足。芯片电泳对脂蛋白所表现出来的高分辨、快速的分离分析能力,使它有希望成为快速、简便、高效分离检测HDL亚类的分析手段之一。 | ||
搜索关键词: | 高密度 脂蛋白 芯片 电泳 方法 | ||
【主权项】:
1、一种高密度脂蛋白芯片电泳方法,其特征是:包括下列步骤:(1)选择缓冲体系:缓冲液为:由40mmol/LTricine、50mmol/L甲基葡胺、0.02mmol/L十二烷基硫酸钠组成,pH8.5;(2)选择电泳芯片:芯片包括十字管道,十字管道的横臂左右两端分别向垂直方向延伸,并分别与缓冲液废液池及缓冲液池相通,十字管道的纵臂上端与样品池相通,十字管道的纵臂下端与通过横向延伸段后与样品废液池相通;在十字管道的交叉处与缓冲液废液池之间的横臂上设置检测点;(3)血清标本及标记:受试者清晨空腹采血3mL,以3000r/min离心10min分离血清,所取血清标本加入同体积由0.05mol/L氯化镁和1.52mmol/L磷钨酸组成的PH为6.1的沉淀剂,混匀,置室温15min后3000r/min离心15min,离心后的上清液供测定;取离心后的6μL上清液加入2μL去离子水,再加入经乙二醇∶甲醇=9∶1混合液预先溶解的4μL0.2g/LNBD C6-ceramide进行避光预染,1min后加入20μL样品缓冲液,作为电泳待测样品;(4)电泳:用1mol/LNaOH浸洗各池和通道1分钟,然后用去离子水浸洗2分钟;样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后,样品池中注入待测样本;进样阶段,样品池+670V,样品废液池接地,缓冲液池+300V,缓冲液废液池+450V,进样45秒后切换电压进入分离阶段;分离时,缓冲液废液池0V,缓冲液池+3500V,样品池和样品废液池均施加+300V,运行温度为25℃;得到高密度脂蛋白亚类HDL2、HDL3的出峰时间、相对含量数据。
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