[发明专利]一种高产碱性果胶酶制备方法

摘要

本发明提供了一种高产碱性果胶酶制备方法，其步骤包括：出发菌株经过紫外光照诱变，初筛、复筛后得到高产碱性果胶酶菌株，将菌种保藏培养基菌种接入种子培养基中，37℃、200r/min培养12-14小时。然后将种子以8％的接种量接入发酵培养基，37℃、200r/min培养24h。最后经过超滤浓缩，真空冷冻干燥后制得碱性果胶酶成品。该法操作工艺简单，原料易得，产品质量好，生产成本低，生产过程中无污染，适合工业化生产。

主权项

一种高产碱性果胶酶制备方法，其特征包括以下几个步骤：(1)紫外灯光诱变处理取约100ml固体斜面培养基倒入10个平板培养皿中，带凝固后每个平板培养皿中加入0.2ml待诱变菌株的稀释培养液，分布均匀。将平皿放于电磁旋转器上，位于紫外灯正下方20cm处，先对平皿照射1min消毒后，打开皿盖在功率15W，波长254nm的紫外灯光下照射90s。照射时对无菌操作台进行遮光处理，避免可见光的影响，同时避免光复活现象。(2)菌种筛选初筛：从经紫外诱变处理并培养24h后的平皿中挑选出大的独立的菌落于初筛培养基中，放入37℃培养箱中培养24h，得到数百个菌落，在菌落周围加入几滴1％的十六烷基二甲基溴化铵，静置10min，若有透明圈产生则为碱性果胶酶产生菌。复筛：将初筛得到的若干菌落接种于斜面培养基，37℃培养24h后，接种到摇瓶进行一级发酵，37℃，200r/min，25h后对发酵液进行酶活测定。选择一株产酶活力最高的菌株接种于菌种保藏培养基。(3)液体种子培养将菌种保藏培养基菌种接入种子培养基中，37℃、200r/min培养12‑14小时；装液量为250ml，三角瓶中装25ml培养基。(4)发酵培养将种子以8％的接种量接入发酵培养基，37℃、200r/min培养24h；装液量为500ml，三角瓶中装50ml培养基。(5)碱性果胶酶精制发酵完毕后加入聚丙烯酰胺作絮凝剂，升温至35℃，搅拌0.5h。之后对发酵液进行超滤浓缩，使体积浓缩4‑5倍，浓缩液在缓慢搅拌下缓缓加入酒精，继续搅拌10min，静置沉淀数小时。最后真空冷冻干燥，烘干制得碱性果胶酶成品。