[发明专利]核糖体抗性诱变选育万古霉素生产菌株及其应用无效
| 申请号： | 200910112190.5 | 申请日： | 2009-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN101608209A | 公开（公告）日： | 2009-12-23 |
| 发明（设计）人： | 卢英华;曾宪海;敬科举;姚传义;凌雪萍 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04;C12P21/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 厦门南强之路专利事务所 | 代理人： | 陈永秀;马应森 |
| 地址： | 361005福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 核糖体抗性诱变选育万古霉素生产菌株及其应用，涉及一种微生物的选育。提供东方拟无枝酸菌的诱变菌株的诱变选育方法及其在制备万古霉素中的应用。将东方拟无枝酸菌接种至高氏1号琼脂培养基平板中培养；取出孢子用无菌水制成孢子悬液涂于万古霉素及链霉素混合抗性的高氏1号琼脂培养基平板中培养；随机选取生长出来的单菌落划线接种于高氏1号琼脂平板培养基上培养，对长出的诱变菌株进行生物活性测定；选取抑菌圈直径大于出发菌株2mm的诱变菌株接种于液体发酵培养基中培养，通过HPLC法测定发酵液中万古霉素的含量，验证所获的万古霉素诱变菌株；将获得的万古霉素诱变菌株经5次连续传代稳定性考察，获得万古霉素生产菌株。 | ||
| 搜索关键词： | 核糖体 抗性 诱变 选育 万古霉素 生产 菌株 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.万古霉素生产菌株的诱变选育方法，其特征在于包括以下步骤：1)将万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌出发菌株AO-1接种至高氏1号琼脂培养基平板中，28～30℃培养5～7d；2)取出孢子用无菌水制成103～104mL-1的孢子悬液，将孢子悬液涂布于50～1250mg/L的万古霉素及100～15000mg/L的链霉素混合抗性的高氏1号琼脂培养基平板中28～30℃培养7～10d；3)随机选取生长出来的单菌落划线接种于高氏1号琼脂平板培养基上，28～30℃培养5～7d，用琼脂块抑菌圈法对长出的诱变菌株进行生物活性测定；4)选取抑菌圈直径大于出发菌株AO-12mm的诱变菌株接种于液体发酵培养基中，于28～30℃、170～220rpm的摇床中培养90～130h，通过HPLC法测定发酵液中万古霉素的含量，验证所获的万古霉素诱变菌株；5)将获得的万古霉素诱变菌株经5次连续传代稳定性考察，获得万古霉素生产菌株。
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