[发明专利]一种重组人促红素分离纯化方法无效
| 申请号： | 200910110593.6 | 申请日： | 2009-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN102040659A | 公开（公告）日： | 2011-05-04 |
| 发明（设计）人： | 于玉根;张翼翔;陈红霞 | 申请（专利权）人： | 深圳新鹏生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/505 | 分类号： | C07K14/505;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 深圳市博锐专利事务所 44275 | 代理人： | 张明;孙鑫 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程重组蛋白纯化领域，尤其涉及一种采用阴离子交换层析技术对重组人促红素进行分离纯化的方法，包括以下步骤：1)样品进行蓝胶层析；2)蓝胶层析产物进行超滤浓缩；3)超滤浓缩产物进行离子交换层析I；4)离子交换层析I产物进行C4反相层析；5)C4反向层析产物进行离子交换层析II；6)离子交换层析II产物进行S-200分子筛层析，得到重组人促红素蛋白。采用本发明所述方法，纯化得到的rhEPO纯度可达99％以上，唾液酸含量达9.5mol/molEPO以上，体内生物学比活性达1.4×105IU/mg以上。本发明在已有工艺方法基础上进行改进，不但解决了生产规模问题，且提高了rhEPO产品质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 人促红素 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种重组人促红素分离纯化方法，包括以下步骤：1)对样品进行蓝胶层析；2)对所述蓝胶层析产物进行超滤浓缩；3)对所述超滤浓缩产物进行离子交换层析I，用pH6.5～7.5的10mmol/L Tris‑HCl缓冲液平衡柱床，上样后先用pH6.5～7.5、含0.03～0.07mol/L NaCl的10mmol/L Tris‑HCl缓冲液洗脱至基线，再用pH6.5～7.5，含0.08～0.15mol/L NaCl的10mmol/L Tris‑HCl缓冲液洗脱；4)对所述离子交换层析I产物进行C4反相层析；5)对所述C4反向层析产物进行离子交换层析II，用pH6.5～7.5的10mmol/L Tris‑HCl缓冲液平衡柱床，上样后先用pH3.7～4.7、含4～8mol/L尿素、0.5～2mmol/L甘氨酸的缓冲液洗脱柱床，洗脱至基线后再用pH6.5～7.5的10mmol/L Tris‑HCl缓冲液淋洗10～15个柱体积，最后用pH6.5～7.5、含0.1～0.4mol/L NaCl的10mmol/L Tris‑HCl缓冲液洗脱；6)对所述离子交换层析II产物进行S‑200分子筛层析，得到重组人促红素蛋白。
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