[发明专利]用于检测小RNA的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于检测小RNA的方法及试剂盒，属于小RNA的检测领域。本发明的用于检测小RNA方法主要包括以下几个步骤：1.RT-引物与目标小RNA杂交；2.反转录；3.在桥探针的介导下，反转录得到的DNA链首尾相接形成一个圆环；4.在DNA聚合酶和第一引物、第二引物的作用下进行分支扩增实时定量检测。本发明的检测小RNA的方法具有灵敏度非常高、动态范围大、抗干扰能力强等优点，在与小RNA探测相关的科学实验、临床诊断、现场测试、基准测试等多个领域具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种用于检测已知序列的小RNA的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)将包含目标小RNA的体系与RT-引物接触，所述RT-引物包含能与目标小RNA的至少一部分序列互补的识别序列，从而所述识别序列与目标小RNA的至少一部分序列互补配对；(2)在第一DNA聚合酶的作用下，以目标小RNA为模板进行反转录，合成出目标小RNA未配对核苷酸序列的互补链，从而得到RNA-DNA杂交链；(3)用核糖核酸酶降解掉步骤2得到的RNA-DNA杂交链中的目标RNA，从而得到单链DNA；(4)将步骤3得到的单链DNA与桥探针接触，所述单链DNA首尾相接之后，包括连接点在内的一部分序列能与所述桥探针的至少一部分序列互补，从而得到开放式桥探针-单链DNA杂交产物；(5)在DNA连接酶的作用下，步骤4得到的开放式桥探针-单链DNA杂交产物中的缺口封闭，从而得到封闭式桥探针-单链DNA杂交产物；(6)在第二DNA聚合酶以及第一引物和第二引物的作用下，对步骤5得到的封闭式桥探针-单链DNA杂交产物进行实时定量分支扩增。