[发明专利]一种结合蛋白的生物表达和化学裂解技术生产多肽的方法无效
| 申请号： | 200910057925.9 | 申请日： | 2009-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN102021193A | 公开（公告）日： | 2011-04-20 |
| 发明（设计）人： | 汪弋;周建忠;涂桂云 | 申请（专利权）人： | 上海立凯德生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C07K1/12;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种结合蛋白的生物表达和化学裂解技术生产多肽的方法，该方法以葡萄球菌核酸酶为载体蛋白，将目的多肽融合在葡萄球菌核酸酶的C端，在葡萄球菌核酸酶和目的多肽之间有一个半胱氨酸，葡萄球菌核酸酶-多肽的融合蛋白在大肠杆菌中表达，并纯化；然后多肽通过化学裂解技术从葡萄球菌核酸酶-多肽融合蛋白上切割下来。本发明采用生物学方法制备多肽，产量高，成本低，环境污染少，且便于工业化实施，具有较大的产业化前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 结合 蛋白 生物 表达 化学 裂解 技术 生产 多肽 方法 | ||
【主权项】：
一种结合蛋白的生物表达和化学裂解技术生产多肽的方法，其特征在于，该方法以葡萄球菌核酸酶为载体蛋白，将目的多肽融合在葡萄球菌核酸酶的C端，在葡萄球菌核酸酶和目的多肽之间有一个半胱氨酸，葡萄球菌核酸酶‑多肽的融合蛋白在大肠杆菌中表达，并纯化；然后多肽通过化学裂解技术从葡萄球菌核酸酶‑多肽融合蛋白上切割下来；该方法具体包括如下步骤：(1)基因合成葡萄球菌核酸酶‑多肽的碱基序列，经过双酶切该碱基序列和表达载体序列，纯化双酶切的两个序列，将碱基序列与表达载体序列进行连接，这就是构建的表达载体；通过酶切、测序鉴定构建的表达载体是否准确；(2)转化表达载体到表达宿主细胞，并进行诱导表达重组多肽；(3)收集、破碎细菌，纯化表达的重组多肽；(4)以乙醇为溶剂，沉淀并收集纯化的重组多肽；(5)将沉淀的重组多肽重溶于盐酸胍缓冲液，加入DTT和NTCB；(6)溶液pH调至9.0‑9.5进行切割；(7)将切割混合物过柱进行纯化。
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