[发明专利]一种检测革兰氏阴性菌群体感应抑制剂的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体公开了一种革兰氏阴性菌群体感应抑制剂的检测方法。其特征是：使用细菌生物感应器紫色杆菌CVO26和己酰基高丝氨酸内酯进行检测，采用肉眼观察即可检测出待检微生物是否产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂。本发明的检测方法简单、快速。

主权项

1、一种革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂的检测方法，其特征是使用细菌生物感应器紫色杆菌CVO26和己酰基高丝氨酸内酯进行检测，将被检测微生物进行以下任一项方法的检测：1)将被检测微生物在含有1.5×10-6mol/L～2.5×10-6mol/L的己酰基高丝氨酸内酯的LB固体平板上划条接种后，培养24h～48h，再将紫色杆菌CVO26平行于被检测微生物划条后继续培养24h～48h，观察现象即可判断，如果紫色杆菌CVO26呈现紫色变浅或褪去的现象，则被检测微生物产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂，如果没这些现象，则被检测微生物不产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂；2)将被检测微生物在LB固体平板的中央划条，培养24h～48h，紫色杆菌CVO26培养16h～24h，与LB琼脂培养基混合，并添加己酰基高丝氨酸内酯至1.5×10-6mol/L～2.5×10-6mol/L，混匀后迅速覆盖在LB固体平板的上面，继续培养24h～48h，观察现象即可判断，如果在被检测微生物周围的紫色杆菌CVO26呈现紫色变浅或褪去的现象，则被检测微生物产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂，如果没这些现象，则被检测微生物不产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂；3)被检测微生物培养后，对培养上清液进行提取后获得提取物，将提取物点样于C18反相薄层板上，充分展开后，把含有紫色杆菌CVO26和1.5×10-6mol/L～2.5×10-6mol/L己酰基高丝氨酸内酯的琼脂LB培养基铺于C18反相薄层板上，培养24h～48h，观察现象即可判断，如果在C18反相在薄层板上有紫色变浅或褪去的区域，则被检测微生物产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂，如果没这些现象，则被检测微生物不产生革兰氏阴性细菌群体感应抑制剂。