[发明专利]一种检测人类RhD血型基因型的多重PCR方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种能够检测人类RhD血型基因型的多重PCR方法，以及应用此方法制备的体外诊断试剂盒，可以检测出人类RhD血型基因型，包括D/D、D/d、DEL、DEL/d和d/d基因型。本发明的方法是利用人类RhD血型不同基因型的特异性序列位点的改变，设计多对引物，进行聚合酶链反应(PCR)来完成的。因此，本发明可被视为是基于PCR-SSP(Sequence specific primer，序列特异性引物)的原理而建立的。利用针对不同位点而设计出序列特异性引物，然后通过优化序列特异性引物的混合比例、反应缓冲液组分和PCR反应条件，从而达到准确检测出人类RhD血型基因型的目的。在一个实施方式中，本发明提供了一种检测人类RhD血型基因型的多重PCR方法；在另一实施方式中，本发明提供了一种检测人类RhD血型基因型的试剂盒。本发明的一个或多个实施方式的细节在附图和说明中有描述。通过阅读附图、详细描述和权利要求可以清楚地了解本发明的其他特征、目的和优点。

主权项

1、一种检测人类RhD血型基因型的多重PCR方法，该方法包括步骤：(1)在0.5mL的Ependoff内加入12.8μlPCR引物缓冲液、2.0μl引物混合物、2.0μldNTP混合物、0.2μlTaqDNA聚合酶和3.0μl模板DNA，充分混合；(2)将Ependoff管放入PCR扩增仪中，9℃变性5分钟，然后进行35个循环的PCR反应，包括9℃、40秒，5℃、40秒和7℃、2分钟，随后7℃延伸5分钟，然后将温度降低到4℃；(3)取出PCR产物，4％琼脂糖凝胶电泳，200V20分钟，紫外灯下观察结果并拍照。