[发明专利]一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法无效
| 申请号： | 200910020033.1 | 申请日： | 2009-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN101508732A | 公开（公告）日： | 2009-08-19 |
| 发明（设计）人： | 樊廷俊;张亚南;徐彬;荆昭 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C07K14/805 | 分类号： | C07K14/805 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266003山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法，首先用注射器插入新鲜毛蚶鳃部取血，离心收集血细胞沉淀，然后用Hepes缓冲液悬浮后，在-80℃和4℃反复冻融破碎细胞，离心收集上清液，4℃离心浓缩至0.5毫升，上样于Superdex200凝胶过滤柱，0.5毫升/分洗脱，1毫升/管收集洗脱组分，检测并收集具有波长415nm高吸收值的洗脱组分，4℃离心浓缩至0.5毫升，继续上样于SephacrylS-100凝胶过滤柱，0.5毫升/分洗脱，1毫升/管收集洗脱组分，最后检测并收集具有波长415nm最高吸收值的洗脱组分，即为毛蚶血红蛋白纯化样品。本发明方法简便、重复性好且血红蛋白的得率高，所纯化血红蛋白仍保持有四级结构和天然活性，便于进行多重生物学功能研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 毛蚶 分离 纯化 血红蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1、一种从毛蚶中分离纯化血红蛋白的方法，首先将清洗后的新鲜毛蚶用注射器进行鳃部取血，离心收集血细胞沉淀并用pH7.2的50mM Hepes缓冲液悬浮血细胞，反复冻融以破碎血细胞，在4℃条件下8000-9000转/分离心收集上清液以分离出毛蚶血红蛋白，用Centricon-10浓缩离心管在4℃条件下3000～4000转/分离心，将该上清液浓缩至0.5毫升，即为毛蚶血红蛋白粗品，上样于Hepes缓冲液预平衡2小时的Superdex200凝胶过滤柱进行第一步柱层析纯化，在4℃条件下洗脱并收集各洗脱组分，分别检测各洗脱组分在波长415nm的光吸收值，收集其中的具有最高光吸收峰值的洗脱组分，经Centricon-10浓缩离心管在4℃条件下浓缩至0.5毫升，再上样于Hepes缓冲液预平衡2小时的Sephacryl S-100凝胶过滤柱进行第二步柱层析纯化，在4℃条件下洗脱并收集各洗脱组分，分别检测各洗脱组分在波长415nm的光吸收值，收集其中的具有最高光吸收峰值的洗脱组分，即为毛蚶血红蛋白纯化样品。
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- 2012-08-14 - 2012-11-28 - C07K14/805
- 本发明属于食品领域，特别涉及亚硝酸盐发色剂的替代品，具体为糖基化酰基血红蛋白配方，由酰基化血红蛋白液与壳聚糖液组成；其制备方法为：将血红蛋白液与烟酰胺和D-异抗坏血酸钠混合后进行血红蛋白的酰基化改性，得酰基化血红蛋白，再将酰基化血红蛋白与壳聚糖混合均匀后，调节pH值，在变性温度以下加热进行蛋白质和糖的化学反应，得糖基化酰基血红蛋白；糖基化酰基血红蛋白优选猪血作原料，制成的新型发色剂糖基化酰基血红蛋白，其对光、热、离子的稳定性和分散性显著提高，从而可替代肉制品中亚硝酸盐的使用，不仅可以降低肉制品中亚硝酸盐的残留量，还可降低猪血对环境的污染，提高畜产品的综合利用价值，产生较好的社会效益和经济效益。
- 一种泥蚶血红蛋白Tg-HbIIA及其应用-201210138736.6
- 包永波;林志华;董迎辉 - 浙江万里学院
- 2012-05-06 - 2012-08-22 - C07K14/805
- 本发明涉及一种泥蚶血红蛋白Tg-HbIIA，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1，核苷酸的序列为SEQ ID NO：2。本发明的泥蚶血红蛋白Tg-HbIIA用于制备免疫增强剂。本发明表达的泥蚶血红蛋白基因HbIIA融合蛋白具有广谱的杀菌活力，特别是对水产动物致病菌弧菌类有较强的杀菌效果，这为研制新型的具有抗微生物活性的药物和在水产养殖业上作为替代抗菌素的新型病害预防治疗制剂奠定了基础。与传统从天然资源提取血红蛋白的方法相比。本发明的制备方法血红蛋白大批量、无毒性，使低成本的规模化生产成为可能，为海洋养殖贝类饲料添加剂和细菌性疾病疫苗的研制提供了一种新的途径。
- 脑红蛋白在促进神经元突起生长中的应用-201210024291.9
- 陈晓钎;余上斌;赖晓晶;李莉;罗振钊;刘倩蓉 - 华中科技大学
- 2010-08-20 - 2012-07-18 - C07K14/805
- 本发明在原代培养的小鼠大脑皮层神经元中发现，随神经元突起的生长，脑红蛋白基因表达量显著增加。在原代培养的小鼠大脑皮层神经元以及小鼠神经瘤母细胞中转染本发明构建的脑红蛋白质粒，与对照组相比，脑红蛋白基因编码的蛋白表达增加，神经元的突起明显增长，证明增加脑红蛋白具有促进神经元突起的生长作用。在原代培养的小鼠大脑皮层神经元以及小鼠神经瘤母细胞中转染本发明构建的脑红蛋白RNA干扰质粒，与对照组相比，内源性脑红蛋白表达减少，神经细胞突起明显变短，证明内源性脑红蛋白具有促进神经元突起生长的生理作用。在小鼠神经瘤母细胞中转染脑红蛋白质粒后再予无氧无糖处理，与对照组相比，神经细胞的突起明显增长，证明增加脑红蛋白具有促进受损神经元突起的生长作用。
- 两种抗氧化功能性肽-Fe-α29肽-卟啉铁和β13肽-卟啉铁-200810153966.3
- 刘安军;胡祥正 - 天津科技大学
- 2008-12-11 - 2010-06-23 - C07K14/805
- 本发明涉及以血红素为原料，经真空-酶定向降解技术，得到的两种具有抗氧化功能性肽-Fe：α29肽-卟啉铁和β13肽-卟啉铁。在α29肽-卟啉铁和β13肽卟啉铁分子中，卟啉铁通过二价铁离子与肽链上的His相连。α29肽-卟啉铁和β13肽-卟啉铁的水溶性好、稳定性强，具有补铁(预防和治疗缺铁性贫血)与抗氧化双重功效。
- 具有改变的电子传递途径的修饰珠蛋白-200880021531.1
- 克里斯托夫·埃里克·库珀;米歇尔·托马斯·威尔逊;布兰东·乔恩·里德 - 威文和科技有限公司
- 2008-06-26 - 2010-05-19 - C07K14/805
- 本发明涉及一种修饰的卟啉基载氧蛋白如血红蛋白，发现在其未修饰状态下具有一个电子传递的低亲和性位点以及一个经由一个或多个蛋白质氨基酸在还原剂和四价铁血红素铁之间的高亲和性电子传递。本发明提供这样的包含增强这种途径的修饰的蛋白。
- 一种血红蛋白提取液的制备方法-200910104070.0
- 刘良明;臧家涛;胥婷;刘建仓;李东红 - 中国人民解放军第三军医大学野战外科研究所
- 2009-06-12 - 2009-11-11 - C07K14/805
- 本发明提供了一种血红蛋白提取液的制备方法，依次进行如下操作：将压积红细胞在透析袋中经低渗透压破碎得到红细胞破碎液；用0℃时终饱和度为5～40％和40～80％对应量的硫酸铵进行两步沉淀，然后将沉淀蛋白重悬后转入透析袋中透析以去除硫酸铵，最后将透析的蛋白液用缓冲液稀释，并离心去除颗粒物。利用本发明方法制备血红蛋白提取液，血红蛋白回收率大于85％，脂蛋白及磷脂残留量小于2％，易于通过0.45μm滤膜，非常适合于阴离子交换柱层析法大量生产的要求。
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