[发明专利]扇贝急性病毒性坏死病毒核酸等温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种扇贝急性病毒性坏死病毒核酸等温扩增检测试剂盒及检测方法。试剂盒包括SEMP采样液、核酸抽提液、LAMP反应液、显色剂和AVNV阳性对照核酸等试剂和多种器材。检测方法是以扇贝急性病毒性坏死病毒基因保守区序列设计的4条引物对扇贝急性病毒性坏死病毒的特异性核酸片段进行定性检测，简便快速，灵敏度高，特异性好，特别是方便用于现场的快速检测。利用本发明仅需一个水浴锅即可在2小时内准确检测出扇贝和养殖水体中低至30个拷贝的病毒粒子。可用于扇贝养殖过程中各时期的病毒跟踪检测，有望替代组织病理学方法、电子显微镜技术、免疫学方法和PCR检测等方法。

主权项

1.一种扇贝急性病毒性坏死病毒核酸等温扩增检测试剂盒，其特征是该试剂盒包括：(1)研磨液，1管，内装SEMP采样液；(2)核酸抽提液A，1管，内装浓度为4M的乙酸钠，pH为5.2；(3)核酸抽提液B，1管，内装无水乙醇；(4)核酸抽提液C，1管，内装70％的乙醇；(5)TE缓冲液，1管，内装TE缓冲液，包括10mM Tris-HCl和1mMEDTA，且pH为8.0；(6)LAMP反应液，1管，内装LAMP反应液，包括双蒸水、MgCl2、dNTP、Betaine、Tris-HCl、KCl、MgSO4、(NH4)2SO4、Triton X-100、LAMP内引物AVNV-FIP和AVNV-BIP、LAMP外引物AVNV-F3和AVNV-B3以及Bst DNA聚合酶；(7)显色剂，1管，内装核酸染料GeneFinderTM；(8)阳性对照核酸，1管，内装AVNV阳性质粒DNA；(9)研磨棒，4支；(10)盒子；(11)一块装于盒子中的泡沫板，其上有放置上述各小管的多个小孔。