[发明专利]海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法，该方法分离纯化异尖属幼虫的虫体抗原，利用生物免疫技术制备特异性多克隆抗体；以96孔聚苯乙烯板为固相载体，事先以相应的完全抗原进行包被、载体蛋白进行封闭；检测时同时以不含有待测物的提取液为阴性对照，以异尖线虫抗原的标准液建立标准曲线；利用常规间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)检测样品的吸光值并计算相应的抑制率，进而根据标准曲线测定样本中待测物(以虫体抗原计)的浓度。本发明灵敏度高、准确性好；操作简便快速，有效缩短了分析时间，可应用于鱼类等海产品中异尖线虫的快速筛选检测。

主权项

1.一种利用免疫试剂盒检测海产品中异尖线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)从海产鱼类中采集分离异尖线虫并制备虫体抗原；(2)利用生物免疫技术制备并纯化异尖线虫的特异性抗体；(3)以虫体抗原包被96孔酶标板并进行封闭处理；(4)对待测样本中的异尖线虫进行分离提取；(5)将工作浓度的抗体溶液与样品提取液同时加入96孔板中，按照常规间接竞争酶联免疫(ELISA)的步骤和方法进行反应，最终利用酶标仪测定OD450值；(6)同时以不含有待测物的提取液代替样品液，同样条件下反应后作为阴性对照；以系列浓度的虫体抗原标准液代替样品液，同样条件下反应后建立标准曲线；(7)样本与阴性对照进行比较，引起吸光值降低10％以上即判断为阳性样本，即含有待测异尖线虫，否则为阴性样本；并根据所建立的标准曲线进行回归分析测定待测样本中异尖线虫(以虫体抗原计)的浓度。