[发明专利]一种用于制备胰岛素化合物的方法

摘要

本发明涉及通过一步酶促反应从相应前体形式制备胰岛素化合物(包括它们的类似物或其衍生物)的方法，该方法包括以最佳的量组合并且同时使用协同作用的胰蛋白酶和羧肽酶B，从而以可控方式指导反应以避免随机不希望副产物的产生。具体地，本发明所述的酶转化反应提供了以下优势：减少操作步骤的数目，所需最终产物的得率和纯度更高。

主权项

1.一种从以下化学式所表示的相应前体制备胰岛素化合物及其类似物或衍生物的方法，所述化学式为：其中，R为氢，或者可化学或酶切割的氨基酸残基，或者包含至少两个氨基酸残基的可化学或酶切割的肽；R₁为OH或者氨基酸残基，或者Y₁-Y₂，其中Y为氨基酸残基；A1至A21部分对应于胰岛素A链，而B1至B27部分对应于胰岛素B链，所述胰岛素B链包含氨基酸取代、缺失和/或氨基酸的添加；R₂为Z₁-Z₂，其中Z₁选自Pro、Lys、Asp，Z₂选自Lys或Pro或Glu，或者为Z₁-Z₂-Z₃，其中Z₁选自Pro、Lys、Asp，Z₂选自Lys或Pro或Glu，而Z₃为苏氨酸或至少三个氨基酸残基的肽部分，前提条件是对应于B30的氨基酸为苏氨酸；X为将A链连接到B链的多肽，其可以在不打断A链或B链的情况下被酶切割，X具有至少两个氨基酸，其中第一个和最后一个氨基酸为赖氨酸或精氨酸；所述方法包括以组合并且同时使用的胰蛋白酶和羧肽酶处理所述前体，前提条件是胰蛋白酶与羧肽酶的相对浓度比为约5∶1至约50∶1。