[发明专利]一种制备视网膜神经节样前体细胞的方法

摘要

本发明公开了一种制备视网膜神经节样前体细胞的方法，该方法采取了骨髓间充质干细胞与孕龄13-14天的小鼠视网膜神经前体细胞进行Transwell分层共培养体系共培养和/或混合共培养，从而诱导制备视网膜神经节样前体细胞。该方法简单、易行，诱导效率高，不需转入外源基因，具有安全、实用的优点。

主权项

1.一种制备视网膜神经节样前体细胞的方法，其特征是，主要包括以下步骤：(1)用含体积百分比为8％-12％的胎牛血清和0.8-1.2％的GlutaMAX的DMEM/F12生长液，培养小鼠的骨髓间充质干细胞；(2)取孕龄13-14天的小鼠，分离出神经视网膜组织，TrypLE Express消化后，用无血清神经生长液进行视网膜神经前体细胞原代培养；(3)用Transwell分层共培养体系，将步骤(1)中培养的第3-5代的骨髓间充质干细胞与步骤(2)新鲜取材的视网膜神经前体细胞进行非接触分层共培养，骨髓间充质干细胞与视网膜神经前体细胞的细胞个数比例为1∶15-25，培养液采用无血清的神经生长液；培养3-21天后，取骨髓间充质干细胞，检测其基因表达，得到视网膜神经节样前体细胞；和/或(4)将步骤(1)中培养的小鼠骨髓间充质干细胞，与步骤(2)新鲜取材的视网膜神经前体细胞进行混合，细胞个数比例为1∶15-25，离心去上清后，用无血清神经生长液进行混合共培养，培养6-7d后，用免疫荧光对骨髓间充质干细胞进行蛋白表达检测，得到视网膜神经节样前体细胞。