[发明专利]区分马传染性贫血中国弱毒疫苗株与美洲流行毒株的方法无效
| 申请号： | 200810214354.0 | 申请日： | 2008-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN101665841A | 公开（公告）日： | 2010-03-10 |
| 发明（设计）人： | 周建华;相文华;耿庆华;郭巍;姜成刚;赵立平;吕晓玲 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 孙皓晨;费碧华 |
| 地址： | 150001黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种区分马传染性贫血中国弱毒疫苗株与美洲流行毒株的方法，包括：(1)从感染了待检测毒株的马外周血白细胞中提取DNA；(2)以该DNA为模板，以P1/P3为引物进行第一轮PCR扩增；(2)以P2/P3为引物进行第二轮PCR扩增；(3)PCR产物进行双酶切分析；如果酶切出了340bp，190bp和150bp片段，则该检测毒株为美洲流行毒株；如果仅切出了340bp片段，则该检测毒株为中国弱毒疫苗株。本发明方法可以对阿根廷代表毒株感染马和中国疫苗免疫马进行准确的区分，可以灵敏特异的检测感染马传贫病毒的马匹，能够鉴别到0.2ng细胞染色体DNA中的病毒特异性DNA片段，而且只用5-7小时就可以快速的进行区分。 | ||
| 搜索关键词： | 区分 传染 性贫血 中国 疫苗 美洲 流行 方法 | ||
【主权项】：
1、一种区分马传染性贫血中国弱毒疫苗株与美洲流行毒株的方法，包括：(1)从感染了待检测毒株的马外周血白细胞中提取DNA；(2)以所提取的DNA为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3为引物进行第一轮PCR扩增；(2)以第一轮PCR扩增的产物为模板，以SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3为引物进行第二轮PCR扩增；(3)取第二轮PCR扩增得到的PCR产物用KpnI和Bsp1286I进行双酶切分析；如果酶切出了340bp，190bp和150bp三条片段，则该检测毒株为美洲流行毒株；如果仅切出了340bp的一条片段，则该检测毒株为中国弱毒疫苗株。
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