[发明专利]固、液二步发酵工艺生产饲用嗜酸乳杆菌的方法

摘要

本发明公开了固、液二步发酵工艺生产饲用嗜酸乳杆菌的方法，属于微生物技术领域。该方法包括(1)解脂假丝酵母(Yarrowia lipolytica)的菌种培养；(2)解脂假丝酵母的固体发酵培养；(3)嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的菌种培养；(4)嗜酸乳杆菌的液体发酵培养；(5)嗜酸乳杆菌发酵液的吸附处理与包装等步骤。本发明以豆粕、麸皮、玉米粉等廉价、易得农付产品为原料，经固、液二步发酵生产饲用嗜酸乳杆菌，具有生产成本低；生长繁殖快，产量高等特点，克服了以往饲用嗜酸乳杆菌生产成本过高的难题，可在畜、禽饲料生产企业中推广应用。

主权项

1. 固、液二步发酵工艺生产饲用嗜酸乳杆菌的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：(1)解脂假丝酵母(Yarrowia lipolytica)的菌种培养：①液体试管种子培养：采用10°Bx糖化麦芽汁为培养基，121℃、20分钟灭菌后，接入解脂假丝酵母原始斜面菌种，28～30℃静止培养24～30h后，于0～4℃保存，备用；②三角瓶种子培养：500ml的三角瓶中装由麸皮、玉米粉和磷酸氢二铵按重量份70～90∶20～30∶0.5～1比例配制而成的培养基20～30g，加水量为固形物重量的1～1.5倍，经0.1Mpa灭菌30min后，每瓶接种步骤(1)①液体试管种子2ml，28～30℃培养36～42h后，于0～4℃保存，备用；(2)解脂假丝酵母的固体发酵培养：固体发酵培养基为豆粕、麸皮、玉米粉和磷酸氢二铵按重量份30～60∶30～60∶10～30∶0.5～1比例配制而成，加与固形物同等重量水，0.1Mpa灭菌30min；将步骤(1)②每三角瓶种子加150～300ml无菌水充分搅拌后，按每瓶种子：以固形物重量计的10～20公斤固体发酵培养基比例接种，于25～30℃室温条件下进行曲盘固体发酵，发酵物料厚度为2-3cm，培养24～30h，至细胞数达到每克干物质60亿时停止发酵，将发酵物65℃下烘干、粉碎、储存，备用；(3)嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的菌种培养：①一级菌种培养：在300ml三角瓶中装入200ml液体MRS培养基，121℃、15分钟灭菌后接入嗜酸乳杆菌原种斜面菌种，经37～40℃培养30～36h后，于0～4℃保存，备用；②二级菌种培养：取步骤(2)干粉状的解脂假丝酵母固体发酵培养物和葡萄糖及水按6～10∶1～4∶100的比例，拌匀、调浆后，加热至85～100℃，保持5min灭菌；冷却至40℃，按发酵体积2～3％的用量接入步骤(3)①一级菌种，于37～40℃静止培养8～10h时搅拌一次，再继续培养4～6h至嗜酸乳杆菌活菌数达50亿CFU/m1以上时终止培养，室温保存，备用；(4)嗜酸乳杆菌的液体发酵培养：取步骤(2)干粉状的解脂假丝酵母固体发酵培养物和葡萄糖及水按重量6～10∶1～4∶100的比例，拌匀、调浆后，加热至85～100℃，保持5min灭菌；培养液冷却到40℃，按发酵体积3～5％的用量接入步骤(3)②二级菌种子，于37～40℃静止培养6～8h时搅拌一次，再继续培养6～8h至嗜酸乳杆菌活菌数达55～80亿CFU/ml时发酵结束；(5)嗜酸乳杆菌发酵液的吸附处理与包装：将步骤(4)嗜酸乳杆菌液体发酵物和以碳酸钙、玉米粉和色拉油按重量份10～20∶75～80∶1～5比例配制而成的吸附剂，按体积与重量1L∶1～2Kg比例进行吸附处理后，在不高于40℃条件下烘干、粉碎、包装成产品。