[发明专利]一种江米酒酒药微生物源凝乳酶的制备方法

摘要

一种江米酒酒药微生物源凝乳酶的制备方法。本发明利用江米面作为培养基，通过酒药发酵生产江米酒，采用硫酸铵分级沉淀法从江米酒中提取凝乳酶，进一步使用SephadexG－100和DEAE－Sephadex A－50纯化，得到高纯度的凝乳酶。以该方法产凝乳酶，原料来源广泛、成本低廉、操作简单、发酵周期短，所产凝乳酶活力高，纯化后凝乳活力达4360±50U/mg，蛋白回收率为16.21±1.98％。

主权项

1.一种江米酒酒药微生物源凝乳酶的制备方法，其特征在于：该方法利用江米面作为培养基，通过酒药发酵生产江米酒，采用硫酸铵分级沉淀法从江米酒中提取凝乳酶，进一步使用Sephadex G-100和DEAE-Sephadex A-50纯化凝乳酶，其具体步骤包括：第一、江米酒的制备：以10g/100mL的江米面溶液、115℃灭菌20min，室温下冷却至30℃作为培养基，将酒药按0.0032g酒药/g江米面的接种量，加入前述冷却好的培养基中，140转/分钟振荡培养50～54小时，得到江米酒；第二、离心：将第一步得到的江米酒在4℃、3500转/分钟条件下离心10min，取上清液备用；第三、凝乳酶的提取：将硫酸铵烘干研细，取第二步得到的上清液，向其中缓慢加入硫酸铵粉末至其饱和度达到40％，4℃静置2小时后，以7000转/分钟离心15min，取上清液，继续加入硫酸铵粉末至其饱和度达到90％，4℃静置2小时，以8000转/分钟离心15min，沉淀溶于0.005mol/L、pH6.28的磷酸盐缓冲液中，4℃透析48小时，即为凝乳酶粗液。