[发明专利]一种江米酒酒药微生物源凝乳酶的制备方法

权利要求书

1.一种江米酒酒药微生物源凝乳酶的制备方法，其特征在于：该方法利用江米面作为培养基，通过酒药发酵生产江米酒，采用硫酸铵分级沉淀法从江米酒中提取凝乳酶，进一步使用Sephadex G-100和DEAE-Sephadex A-50纯化凝乳酶，其具体步骤包括：

第一、江米酒的制备：以10g/100mL的江米面溶液、115℃灭菌20min，室温下冷却至30℃作为培养基，将酒药按0.0032g酒药/g江米面的接种量，加入前述冷却好的培养基中，140转/分钟振荡培养50～54小时，得到江米酒；

第二、离心：将第一步得到的江米酒在4℃、3500转/分钟条件下离心10min，取上清液备用；

第三、凝乳酶的提取：将硫酸铵烘干研细，取第二步得到的上清液，向其中缓慢加入硫酸铵粉末至其饱和度达到40％，4℃静置2小时后，以7000转/分钟离心15min，取上清液，继续加入硫酸铵粉末至其饱和度达到90％，4℃静置2小时，以8000转/分钟离心15min，沉淀溶于0.005mol/L、pH6.28的磷酸盐缓冲液中，4℃透析48小时，即为凝乳酶粗液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将上述第三步得到的凝乳酶粗液进行如下纯化：

首先利用Sephadex G-100凝胶柱层析纯化凝乳酶粗液，以0.005mol/L、pH6.28的磷酸盐缓冲液作为洗脱液，分步收集，检测收集液活性，合并有活性的洗脱液；

利用DEAE-Sephadex A-50进一步纯化，以0.02mol/L、pH 7.4的磷酸盐缓冲液为起始缓冲液，采用NaCl梯度洗脱，分布收集，检测活性，合并有活性洗脱液，浓缩冻干得到高纯度的凝乳酶。