[发明专利]一种利用整合子系统定点、定向的基因重组方法无效
| 申请号： | 200810034791.4 | 申请日： | 2008-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN101280301A | 公开（公告）日： | 2008-10-08 |
| 发明（设计）人： | 吕元;杨泽华;关明;魏取好;陈楠 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/11;C12N15/70;C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200031*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属生物技术领域，涉及一种利用整合子系统定点、定向的基因重组方法，采用整合子系统作为工具，首先构建在多克隆位点两侧含有attC序列的工具载体，然后将目的基因克隆到该载体，目的基因在宿主菌表达整合酶的情况下，能够定点且定向地插入到大肠杆菌基因组DNA中的attI位点。本方法简便易行，不需要特殊的仪器和试剂，仅需要4天时间就可将目的基因插入到宿主菌的染色体DNA中。所述的整合子系统作为分子生物学工具具有良好的应用前景，可用于获取含有目的基因的大片段DNA；同时，目的基因插入到宿主染色体定点且定向的特性，有助于解决在基因治疗中目的基因插入基因组DNA的靶向性问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 整合 子系统 定点 定向 基因 重组 方法 | ||
【主权项】：
1、一种利用整合子系统定点、定向的基因重组方法，其特征是包括下述步骤：(1)目的基因DNA的获取：用PCR技术扩增目的基因DNA后纯化，备用；(2)构建工具载体pACZC；(3)在pACZC质粒的LacZ基因中插入链霉素筛选标志基因aadA2，在特定位置引入限制性内切酶位点，得重组质粒pACAZC；(4)将目的基因克隆到工具载体pACAZC；(5)步骤(4)的含有目的基因的重组质粒转化大肠杆菌株DHS1；(6)将步骤(5)的转化菌涂布含有链霉素的LB琼脂平板；(7)利用PCR按常规方法对阳性克隆进行筛选。
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