[发明专利]一种利用整合子系统定点、定向的基因重组方法

权利要求书

1、一种利用整合子系统定点、定向的基因重组方法，其特征是包括下述步骤：

(1)目的基因DNA的获取：

用PCR技术扩增目的基因DNA后纯化，备用；

(2)构建工具载体pACZC；

(3)在pACZC质粒的LacZ基因中插入链霉素筛选标志基因aadA2，在特定位置引入限制性内切酶位点，得重组质粒pACAZC；

(4)将目的基因克隆到工具载体pACAZC；

(5)步骤(4)的含有目的基因的重组质粒转化大肠杆菌株DHS1；

(6)将步骤(5)的转化菌涂布含有链霉素的LB琼脂平板；

(7)利用PCR按常规方法对阳性克隆进行筛选。

2、按权利要求1所述的方法，其特征是所述的步骤(1)所述的目的基因选自任何需要的基因。

3、按权利要求1所述的方法，其特征是所述的步骤(6)的链霉素浓度是20μg/ml。

4、一种重组质粒pACZC，其特征是具有序列1的结构。

5、按权利要求4所述的重组质粒pACZC，其特征是通过在LacZ基因两端引入整合酶所识别的重组序列attCs和attCe，克隆到质粒pACYC184后，得重组质粒pACZC。

6、一种重组质粒pACAZC，其特征是具有序列2的结构。

7、按权利要求6所述的重组质粒pACAZC，其特征是通过在重组质粒pACZC的LacZ基因中融合了aadA2基因，其编码对链霉素的抗性。

8、权利要求4所述的重组质粒pACZC在制备将任意基因片段装配成基因盒结构中的用途。

9、权利要求6所述的重组质粒pACAZC中的aadA2基因在筛选细菌染色体上整合有目的基因的阳性克隆中的用途。