[发明专利]石蜡组织芯片制备方法

摘要

本发明公开了一种石蜡组织芯片制备方法，包括定制石蜡模、定制组织阵列孔板、定制芯棒、定制采样针、制作受体组织芯片阵列石蜡块、供体石蜡块的采样及其组织芯片石蜡块的制备等步骤。本发明方法简便、易操作，实验效果好。

主权项

1、一种石蜡组织芯片制备方法，其特征是：包括下列步骤：(1)定制石蜡模：按横向多排孔、纵向二排孔形式制作石蜡模，外形呈矩形多孔立方体，石蜡模外壁上设有与组织阵列孔板匹配的凹形吻合口；(2)定制组织阵列孔板：板体一端呈喙样凸与石蜡模凹形吻合口相互凸凹匹配，其另一端设有将阵列孔板与石蜡模吻合的固定螺丝；阵列孔板纵向设有上下分隔的二组阵列，每组阵列排列方式不同，每组阵列的面积与石蜡模的孔匹配；(3)定制芯棒：呈多节状直径不等的实心圆柱体，插在阵列孔板上的孔中，与阵列孔板和石蜡模联合匹配使用制作石蜡组织芯片受体石蜡块；(4)定制采样针：采样针采用针管中穿装活动式针芯的形式；(5)制作受体组织芯片阵列石蜡块：将组织阵列孔板安装在石蜡模上并将固定螺丝旋紧；石蜡模的两端下方用木条垫高，以便芯棒伸入；向组织阵列孔板上的孔依次插入与其孔径匹配的芯棒，插满或按预设二维阵列排布表按序插入；用一平板压在芯棒粗端形成的平面，组成含芯棒的从下到上的石蜡模+组织阵列孔板+平板的“三明治”样结构；然后，将其倒置，此时最上方为石蜡模的正面和从其孔中伸出的芯棒细端平面；临注蜡时用电吹风吹拂芯棒细端平面进行预加热，然后，再向芯棒平面注入85℃左右的液态石蜡，使其充盈每根芯棒杆的周围，连续注蜡直至需要的厚度即可；在石蜡刚呈固态时，倒翻恢复到原来的石蜡模+组织阵列孔板+平板“三明治”样结构，而此时最下面是芯棒细端阵列平面；将平板从芯棒粗端平面取下转移到芯棒细端阵列平面，即“三明治”样结构最下方，形成含芯棒的由下到上的平板+石蜡模+组织阵列孔板的结构，其最上面是芯棒粗端横截面形成的平面；双手握牢石蜡模+组织阵列孔板组合结构，轻轻用力向下压，使石蜡模的最下面的平面达到平板，而顶在平板上的芯棒细端平面受其反作用力使芯棒的阵列向上运动，此时芯棒的芯棒粗端平面突出于组织阵列孔板上方的平面，形成芯棒粗端平面与组织阵列孔板上方平面间的间隙，因此，暴露出芯棒粗端平面下方的芯棒杆；用镊子快速伸向芯棒粗端平面的下方，向上稍用力依次将芯棒全部拨出，旋松固定螺丝，拿开组织阵列孔板，退出石蜡块，再用医用缝合线按芯棒节段的距离，缠绕其厚度侧一周，在绕线的启始端；线的一端固定不动，把握另一端并将着力点稳定在绕线的启始端，稍用力将绕线全部拉出，可获取所需芯穴直径的石蜡块，即受体石蜡组织芯片阵列蜡块；(6)供体石蜡块的采样及其组织芯片石蜡块的制备：搜集或制备供体石蜡组织块：将供体石蜡块常规切片和HE染色，阅片确定有典型病变的石蜡块并拟定可采样部位或区域，最后记录存档；取一块石蜡模放在玻璃平板上，然后，将制成的受体组织芯片石蜡块放入石蜡模的孔中待用；采样和植入：对石蜡组织的采样方法为：取采样针，先拨出针芯并用采样针管对供体石蜡块的拟定采样部位进行采样，即将采样针管压入供体石蜡块中，使供体组织蜡芯进入针管内；将采样针针管插进采样针管，再均匀用力推动针芯柄将供体组织蜡芯从针管中推出，依次插入受体石蜡块的芯片穴位中；直到完成预设的二维组织芯片阵列；对于新鲜组织的采样方法为：取采样针，先拨出针芯并用采样针管对新鲜组织的拟定采样部位进行采样，即将采样针管压入新鲜组织中，使新鲜组织进入针管内，再用针芯将采样新鲜组织推出，然后按常规石蜡组织制片方法到浸蜡结束后，取出组织蜡芯待用；植入时选取待用组织蜡芯用镊子放入受体石蜡块的芯片穴位中；直到完成预设的二维组织芯片阵列；此时，石蜡组织芯片蜡块芯片种植完成，即可进入待熔合阶段；熔合：轻轻震动“石蜡模+石蜡组织芯片蜡块+玻璃板”组合结构，使种植的全部组织蜡芯片在同一平面，再放到约50-55℃烘箱中，使组织蜡芯与受体石蜡块互相融合；修整：取出石蜡块，用玻璃片轻压含有组织蜡芯柱的一面，尽量使所有组织芯片的组织蜡芯的横截面保持在一个平面上，放冰箱待用