[发明专利]人对氧磷酶3基因表达载体的构建及其应用

摘要

本发明属于生物技术制药技术领域。本发明应用人对氧磷酶3基因(hPON3)构建了哺乳动物细胞中表达的重组质粒pCI－hPON3，使用电转移法在小鼠骨骼肌组织中使hPON3得到高效表达并分泌入血，提高了血清中PON3水平，使小鼠抗氧化压力的能力加强，有效的防治肝脏损伤。hPON3转基因表达小鼠血清水解二氢香豆素的活性升高约1.4倍，并可持续24天。转基因组和正常小鼠分别腹腔注射四氯化碳建立小鼠急性和亚急性肝损伤模型后，转基因组小鼠与CCl₄对照组相比血清ALT和AST水平显著降低，肝脏匀浆的丙二醛(MDA)水平降低，还原型谷胱甘肽(GSH)和总抗氧化能力(T－AOC)升高，病理学切片结果显示转基因组小鼠肝细胞损伤程度明显低于CCl₄对照组，表明重组人PON3质粒转基因表达可有效提高血清PON3活性，降低肝脏氧化压力，可用于肝脏损伤的预防和治疗。

主权项

1.一种应用人对氧磷酶3即hPON3构建的在哺乳动物细胞内表达的重组质粒，其特征是将PCR扩增的hPON3基因克隆于pCI载体的EcoR I和SalI位点之间，使hPON3基因位于CMV启动子的控制之下。