[发明专利]一种检测土壤中芳基硫酸酯酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中芳基硫酸酯酶活性的分析方法：1)分别称取土样置于2n个三角瓶中，向三角瓶中加入4ml缓冲溶液，向第一组n个三角瓶中加入1ml底物对硝基苯硫酸钾溶液，第二组n个三角瓶作为对照组，摇匀，盖好瓶塞后恒温培养；2)培养结束后，向三角瓶中加入4ml碱性三羟基氨基甲烷溶液和1ml氯化钙溶液终止反应并显色，并向第二组对照组加入1ml底物溶液，混匀，过滤；3)在410nm处比色测定滤液的吸光度值A；4)根据标准曲线计算对硝基苯酚含量，进而计算芳基硫酸酯酶酶活性。本发明简化了操作步骤，减少了实验过程中的不确定性；减少对设备要求的依赖性；方法准确度高，易操作；结果稳定可靠，重现性好。

主权项

1.一种检测土壤中芳基硫酸酯酶活性的分析方法，其特征在于：1)分别称取1g-2g鲜土样品2n份分别置于2n个三角瓶中，n≥3，分成二组，每组n个，向2n个三角瓶中加入4-8mL pH＝5.75-5.85乙酸缓冲溶液，向第一组n个三角瓶中加入1-2mL 25-50m moL·L-1的底物对硝基苯硫酸钾工作液，第二组n个三角瓶作底物试剂对照，混匀，盖好瓶塞，放在36.5-37.5℃恒温培养中恒温培养1-2h；2)培养结束后，加入4-8mL 0.49-0.51moL·L-1碱性THAM(三羟基氨基甲烷)溶液和1-2mL 0.49-0.51moL·L-1氯化钙溶液，并向第二组三角瓶中加入1-2mL 25-50m moL·L-1的底物对硝基苯硫酸钾工作液，混匀，过滤；3)用分光光度法于410nm处分别测定上述所得三角瓶中溶液的吸光度A；以对硝基苯酚溶液标准溶液，以对硝基苯酚溶液的系列浓度和其分别用分光光度法在410nm测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；根据吸光值A和斜率b，计算所测定滤液中对硝基苯酚的浓度S，S＝A*b；计算样品中对硝基苯酚含量m1；4)计算磷酸单酯酶酶活性：计算公式为：w＝m1/(m2×K)＝Sμg C6H5NO3·g-1干土·h-1式中：w：单位土壤单位时间内对硝基苯酚的产生量；m1：测试溶液中对硝基苯酚的质量，样品测定吸光值折换的产物质量值；m2：鲜土样品质量；k：水分系数，单位重量的烘干土重/鲜土重。