[发明专利]一种马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶的分泌表达方法有效
申请号: | 200710159198.8 | 申请日: | 2007-12-26 |
公开(公告)号: | CN101469325A | 公开(公告)日: | 2009-07-01 |
发明(设计)人: | 张素芳;赵宗保;杨帆 | 申请(专利权)人: | 中国科学院大连化学物理研究所 |
主分类号: | C12N9/24 | 分类号: | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/81;C12R1/84 |
代理公司: | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 | 代理人: | 马 驰;周秀梅 |
地址: | 116023*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 本发明涉及一种外切菊粉酶的真核表达方法。其主要步骤是:首先将马克斯克鲁维酵母的外切菊粉酶的核苷酸序列(如SEQ ID No:1所示)通过限制性内切酶位点与毕赤酵母表达质粒pPICZαA连接获得重组表达载体,然后将重组表达载体导入毕赤巴斯德酵母宿主菌X-33或SMD1168中经诱导发酵表达目的蛋白(马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶)。本发明为开发具有工业应用价值的外切菊粉酶奠定了基础。 | ||
搜索关键词: | 一种 马克 克鲁 酵母 外切 菊粉 分泌 表达 方法 | ||
【主权项】:
1. 一种马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶的分泌表达方法,首先将马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶的编码基因通过限制性内切酶位点与表达载体连接获得重组表达载体,然后将重组表达载体导入宿主菌细胞经诱导表达获得目的蛋白,其特征在于:所述的目的蛋白编码基因是SEQ ID No:1中第15位至第1613位的碱基所构成的核苷酸序列,所述表达载体为毕赤酵母/大肠杆菌穿梭质粒pPICZαA,所述宿主细胞为毕赤氏巴斯德酵母X-33或SMD1168;所述的重组质粒导入宿主菌前,先将重组质粒利用Sac I限制性内切酶进行线性化,然后在宿主菌基因组的AOX1基因处整合插入。
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