[发明专利]鹿角蕨的无菌孢子萌发和试管育苗方法

摘要

本发明涉及鹿角蕨的繁殖栽培方法，具体来说涉及采用无菌孢子萌发和试管育苗繁殖栽培鹿角蕨的方法。采集健壮生长的鹿角蕨属(Platycerium)中各种鹿角蕨叶背的成熟孢子，经过孢子无菌萌发、配子体生长培养、授精形成合子、孢子体增殖培养、生根培养、出瓶移栽等步骤繁殖栽培鹿角蕨。本发明方法能成功地进行鹿角蕨的快速繁殖，培养基成分独特、简单，繁殖方法新颖，具有投入少，产出高的特点，是利用植物试管技术进行珍稀植物种苗的规模化生产的高新生物技术，试管种苗移栽成活率达80％～90％。

主权项

1.鹿角蕨繁殖栽培方法，其特征包括以下步骤：(1)孢子无菌萌发：采集健壮生长的鹿角蕨(Platycerium)叶背的成熟孢子用70％～75％酒精浸泡10～30s，取出置于0.1％～0.2％升汞溶液或1％～2％的次氯酸钠溶液消毒10～15min，无菌水洗后，接种到孢子萌发培养基上；在(25±1)℃先暗培养2～3周，然后8～12h/天、1500～2000lx光照下，培养形成原叶体，所述的培养基每升中含有活性炭0.5～1g，椰子乳50～150mL，赤霉素0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为MS；(2)配子体生长培养：将步骤(1)的原叶体转入配子体生长培养基，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照下培养，形成丛生叶状的配子体，所述的培养基每升中含有水解酪蛋白0.1～0.3g，6-苄基嘌呤0.2～1.0mg，萘乙酸0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为MS；(3)授精形成合子：将步骤(2)的丛生的叶状的配子体先接种到液体配子体生长培养基上，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照，50～100r/min振荡培养2～3天，再将液体培养过的叶状体接种到固体配子体生长培养基，在与上述相同的条件下，继续培养长出2倍体的孢子体植株，所述的液体配子体生长培养基每升中含有活性炭0.5～1g，椰子乳50～150mL，赤霉素0.1～0.5mg，其余为MS，所述的固体配子体生长培养基每升中含有水解酪蛋白0.1～0.3g，6-苄基嘌呤0.2～1.0mg，萘乙酸0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为MS；(4)孢子体增殖培养：将步骤(3)中的孢子体小植株接种到绿球体诱导增殖培养基上，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照培养，在植株基部诱导形成绿球体，这些绿球体在与上述相同的培养基上增殖，并形成小植株，所述的培养基每升中含有椰子乳100～150mL，蛋白胨1～2g，6-苄基嘌呤0.2～1.0mg，琼脂5～7g，其余为MS；(5)生根培养：将步骤(4)得到的小植株接种到生根壮苗培养基上，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照培养，形成带根的健壮植株，所述的培养基每升中含有活性炭0.3～0.5mg，吲哚丁酸0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为1/2 MS，所述的1/2 MS是将MS中的大量元素减半，其它成分不变组成的培养基；(6)出瓶移栽：生根苗于70％～80％遮荫的自然光下炼苗5～7天，将其由培养瓶中取出，洗净根部的培养基，栽培于水苔中，25～28℃，80％～90％遮荫，湿度60％～90％，保持通风，植株恢复生长。