[发明专利]鹿角蕨的无菌孢子萌发和试管育苗方法

权利要求书

1.鹿角蕨繁殖栽培方法，其特征包括以下步骤：

(1)孢子无菌萌发：采集健壮生长的鹿角蕨(Platycerium)叶背的成熟孢子用70％～75％酒精浸泡10～30s，取出置于0.1％～0.2％升汞溶液或1％～2％的次氯酸钠溶液消毒10～15min，无菌水洗后，接种到孢子萌发培养基上；在(25±1)℃先暗培养2～3周，然后8～12h/天、1500～2000lx光照下，培养形成原叶体，所述的培养基每升中含有活性炭0.5～1g，椰子乳50～150mL，赤霉素0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为MS；

(2)配子体生长培养：将步骤(1)的原叶体转入配子体生长培养基，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照下培养，形成丛生叶状的配子体，所述的培养基每升中含有水解酪蛋白0.1～0.3g，6-苄基嘌呤0.2～1.0mg，萘乙酸0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为MS；

(3)授精形成合子：将步骤(2)的丛生的叶状的配子体先接种到液体配子体生长培养基上，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照，50～100r/min振荡培养2～3天，再将液体培养过的叶状体接种到固体配子体生长培养基，在与上述相同的条件下，继续培养长出2倍体的孢子体植株，所述的液体配子体生长培养基每升中含有活性炭0.5～1g，椰子乳50～150mL，赤霉素0.1～0.5mg，其余为MS，所述的固体配子体生长培养基每升中含有水解酪蛋白0.1～0.3g，6-苄基嘌呤0.2～1.0mg，萘乙酸0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为MS；

(4)孢子体增殖培养：将步骤(3)中的孢子体小植株接种到绿球体诱导增殖培养基上，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照培养，在植株基部诱导形成绿球体，这些绿球体在与上述相同的培养基上增殖，并形成小植株，所述的培养基每升中含有椰子乳100～150mL，蛋白胨1～2g，6-苄基嘌呤0.2～1.0mg，琼脂5～7g，其余为MS；

(5)生根培养：将步骤(4)得到的小植株接种到生根壮苗培养基上，在(25±1)℃，8～12h/天、1500～2000lx光照培养，形成带根的健壮植株，所述的培养基每升中含有活性炭0.3～0.5mg，吲哚丁酸0.1～0.5mg，琼脂5～7g，其余为1/2 MS，所述的1/2 MS是将MS中的大量元素减半，其它成分不变组成的培养基；

(6)出瓶移栽：生根苗于70％～80％遮荫的自然光下炼苗5～7天，将其由培养瓶中取出，洗净根部的培养基，栽培于水苔中，25～28℃，80％～90％遮荫，湿度60％～90％，保持通风，植株恢复生长。

2.根据权利要求1的鹿角蕨繁殖栽培方法，其特征是步骤(1)中的鹿角蕨是重裂鹿角蕨(Platycerium wallichii)、二叉鹿角蕨(Platycerium bifurcatum)、大鹿角蕨(Platycerium grande)、长叶鹿角蕨(Platycerium  willinckii)、美洲鹿角蕨(Platycerium andinum)或昆士兰鹿角蕨(Platycerium hillii)。

3.根据权利要求1或2的鹿角蕨繁殖栽培方法，其特征是步骤(1)中所述的无菌水洗5～6次，在25±1℃暗先培养2～3周，然后8～12h/天，1500～2000lx光照下，继续培养4～5周，形成原叶体；步骤(2)中培养4～5周，形成丛生叶状的配子体；步骤(3)中先接种到液体配子体生长培养基上，培养2～3天，再将液体培养过的叶状体接种到固体配子体生长培养基上，继续培养3～4周，长出2倍体的孢子体植株；步骤(4)中培养6-8周，在植株基部诱导形成绿球体；步骤(5)中培养4～6周，形成带根的健壮植株；步骤(6)培养30-40天后可上盆栽培。