[发明专利]葡聚糖单克隆抗体的制备方法

摘要

本发明涉及免疫学和制糖技术，目的是利用免疫学的原理测定糖品中葡聚糖含量，提出一种葡聚糖单克隆抗体的制备方法，其包括如下步骤：A.抗原选择及其偶联，选择钥孔戚血红蛋白和牛血清白蛋白分别与葡聚糖偶联得到抗原；B.动物免疫和试血；C.细胞融合与培养；D.杂交瘤细胞的筛选；E.杂交瘤细胞的克隆化；F.杂交瘤腹水的制备。本发明具有实质性特点和显著进步：1.原料来源丰富；2.安全可靠；3.获得葡聚糖特异性单抗杂交瘤细胞，可大量扩培，用其可容易开发定量检测葡聚糖的夹心ELISA免疫学试剂盒，因而将使快速、准确测定蔗汁、在制品、制品中的葡聚糖含量成为可能。

主权项

1.葡聚糖单克隆抗体的制备方法，其包括如下步骤：A.抗原选择及其偶联，利用载体偶联技术和免疫方案，选择钥孔戚血红蛋白和牛血清白蛋白分别与葡聚糖偶联得到抗原；B.动物免疫和试血，选择4-8周龄雌性BALB/c小鼠，取步骤A得到的抗原进行免疫试验，然后分离血清，用间接ELISA法测定小鼠血清中抗体效价；C.细胞融合与培养，用RPMI 1640-10％FCS培养液培养免疫小鼠骨髓瘤细胞SP2/0，并与免疫小鼠分离出的脾细胞混合，在45％PEG介导下进行细胞融合，将细胞混悬在RPMI1640-20％FCS中，加入培养板培养；D.杂交瘤细胞的筛选，取过程C的培养板中杂交瘤细胞上清，用间接ELISA方法检测上清中抗体；E.杂交瘤细胞的克隆化，取阳性孔杂交瘤细胞，用有限稀释法进行克隆化，共进行2轮克隆化，最终得到杂交瘤细胞株；F.杂交瘤腹水的制备，将培养的杂交瘤细胞注入Pristane处理过的小鼠腹腔，获小鼠腹水。